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目的:构建由pSIREN-RetroQ-ZsGreeen载体介导针对MDR1基因的短发卡RNA (shR NA)真核表达载体,研究利用shRNA来逆转膀胱肿瘤细胞BIU-87/ADM多药耐药性的可行性。方法:分别针对MDR1基因已知mRNA序列不同位点,选择两条靶序列,按BarnH I+Sense+Loop+Antisense+终止信号+ EcorI结构合成编码shRNA的DNA序列及其反义序列,然后利用基因重组技术构建靶向MDRlshRNA真核表达载体,成功构建后通过脂质体介导将重组质粒分别转染至膀胱肿瘤耐药细胞BIU-87/ADM,利用RT-PCR检测BIU-87/ADM细胞MDR1基因的表达,以及免疫组织化学检测BIU-87/ADM细胞膜表面P-gp表达,同时利用MTT法检测膀胱癌多药耐药细胞BIU-87/ADM对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性。最后,结果采用spss统计软件进行分析处理,组间均采用两样本t检验。结果:构建成的重组质粒pSIREN-RetroQ-ZsGreeen-A和pSIREN-RetroQ-ZsGreeen -B经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变;将成功构建的2个重组质粒分别转染至BIU-87/ADM细胞,24小时后通过RT-PCR检测显示均明显抑制BIU-87 /ADM细胞株MDR1基因表达(P<0.05),细胞mRNA转录比值分别下降了72.57%和78.88%。转染48小时后,通过免疫组织化学检测显示P-gp表达率分别为48.53±2.65%和43.58±2.52 %,显著低于未转染组(P< 0.05)。同时转染48小时后,利用MMT法检测显示膀胱癌耐药株BIU-87/ADM对化疗物ADM的敏感性明显增强,对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为52.02%和54.87%(P< 0.05)。此外,2个重组质粒对逆转膀胱癌多药耐药细胞BIU-87 /ADM的效果无差异。结论:shRNA真核表达载体可明显抑制BIU-87/ADM细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,恢复BIU-87/ADM细胞对化疗药物的敏感性,给逆转膀胱肿瘤的多药耐药提供了一种新的手段。