产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)是养殖业最常见能够导致仔猪腹泻的病原体之一。新生仔猪由于肠道较为脆弱,免疫机能发育不完全,极易受到各类病原体的侵袭。ETEC导致的仔猪大肠杆菌性腹泻伴有多种症状,其主要表现为仔猪黄白痢,受腹泻影响的仔猪通常还会出现虚弱脱水、精神萎靡、发育缓慢等问题。仔猪腹泻严重影响仔猪健康和生产性能,治疗不及时可导致仔猪生产性能下降,严重时可造成仔猪死亡。仔猪腹泻处理不及时可造成病原体在养殖环境内快速传播,影响生猪养殖规模,给养殖业造成巨大的经济损失。仔猪腹泻造成养殖成本增加,影响生猪供应,猪肉制品价格上涨,给消费者带来经济负担。本实验以产肠毒素大肠杆菌F4、F5、F6、F18、F41菌毛及STa-LTB-STb重组肠毒素为抗原,联合制备针对菌毛和肠毒素两大靶点的多价疫苗,制备特异性IgY,实现对两大毒力因子的双重阻断。免疫蛋鸡,收集卵黄液并利用水稀释-硫酸铵沉淀法结合超滤浓缩对卵黄抗体进行分离纯化。实验结果显示,抗体最终纯度达到84.8%,IgY对五种菌毛抗原的效价均超过1:10000,最高效价可达1:32000,对重组肠毒素的效价最高达1:8000,表明多价抗原具有良好的免疫原性,适于IgY的生产及制备。体外实验中,利用胶体金标记的兔抗鸡IgG特异性吸附卵黄抗体,在透射电镜下观察卵黄抗体同各抗原的结合效果,结果显示特异性卵黄抗体能同菌体表面紧密结合,同时被结合菌体表面发生结构改变。液体环境多价特异性卵黄抗体有效抑制K88、K99、987p、F18和F41等五种产肠毒素大肠杆菌增殖,其抑制效果具有浓度依赖性,抑菌效果随卵黄抗体浓度升高更加显著。以二甲苯和十六烷为有机相,借助碳氢吸附实验检验卵黄抗体对各株ETEC疏水性的影响,结果显示各菌体表面疏水性显著增强,与以往研究结果有所差别,为探明卵黄抗体的真实作用机制提供参考。动物实验中,以断奶SD大鼠为对象建立模型,以灌胃的方式进行攻毒和给药,分别检测特异性卵黄抗体和非特异卵黄抗体对ETEC的与预防和治疗效果。特异性IgY有效降低了大鼠的腹泻率,促进增重,改善生长发育情况,显著降低血液及组织中的TNF-α、IL-1β和IL-6水平(P<0.05),缓解由ETEC引起的炎症反应,保护肠道绒毛免受ETEC肠毒素的破坏,体现出良好的防治效果,实现了对菌毛和肠毒素的双重阻断,对大鼠肠道起到全方位的保护作用,为进一步探究卵黄抗体在动物体内的作用机制以及在养殖动物中的推广应用提供实验参考。