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目的:宫颈癌（Cervical Cancer,CC）是常见妇科肿瘤之一,虽已证实高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）的持续感染是其发生发展的重要致病因素,但较高的HPV感染率却伴随着相对较低的宫颈癌发病率,不但使宫颈癌的筛查及一级预防面临卫生经济学的沉重负担,也提示在宫颈癌发生发展过程中存在个体间遗传差异。因此,深入探究宫颈癌的确切发病机制,并寻找新型诊断标志物与潜在治疗靶点至关重要。环状RNA（circular RNA,circRNA）是一种不具有3’端、5’端与poly A尾的单链闭合的非编码RNA。独特的封闭式结构使得circRNA能够逃避核酸外切酶的作用,与线性RNA相比更加保守与稳定,且具有细胞特异性、组织特异性与时序特异性。已证实circRNA具有作为新型肿瘤标志物的潜质,并在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。circRNA可参与基因的转录后调节,与RNA结合蛋白相互作用,作为miRNA海绵调节靶基因表达,甚至可翻译成蛋白质。然而circRNA在宫颈癌中的表达情况及作用机制仍未可知。本研究运用circRNA芯片,挖掘宫颈癌癌组织与癌旁组织差异表达circRNAs以及下游靶点,为宫颈癌的疾病进程提供潜在标志物,并为明确宫颈癌的发生发展机制以及分子治疗提供新思路。研究方法:利用circRNA芯片筛查3组宫颈癌癌组织及相应癌旁组织差异表达的circRNAs,结合circ RNA类型、差异倍数、表达丰度等筛选候选circRNAs。并在成对组织中进行qRT-PCR实验验证。分析circRNA8924与宫颈癌患者临床病理资料的关系。利用慢病毒构建稳定转染circRNA8924过表达及敲低细胞模型后,CCK-8检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期,明确circRNA8924在宫颈癌细胞恶性生物学行为中的作用。qRT-PCR实验检测miR-518d/519-5p的表达水平,并分析其与circRNA8924相关性。双荧光素酶报告基因明确circRNA8924与miR-518d-5p/519-5p家族的靶向结合。运用瞬时转染技术改变miRNA的表达水平之后,通过细胞功能学实验明确circRNA8924对于miR-518d/519-5p的竞争性作用。最后通过qRT-PCR实验、双荧光素酶实验、Western Blot实验,分析mi R-518d/519-5p家族对于CBX8的靶向作用,明确circRNA8924在宫颈癌细胞中的具体作用机制。结果:1.circNRA芯片筛查共发现591种在宫颈癌癌组织与癌旁组织中差异表达的circRNA（FC≥2,P<0.05）,包括外显子型（exonic）447种,内含子型（intronic）72种,正义重叠型（sense overlapping）46种,反义型（antisense）18种,基因间型（intergenic）8种。237种在癌组织中表达上调,354种在癌组织中表达下调。对于8种候选circRNA的qRT-PCR验证结果表明,hsacirc0000514、circRNA8924表达上调,hsacirc0000301、hsacirc0000407、circRNA11641表达下调,与芯片结果一致（P<0.05）;hsacirc0078738表达下调,与芯片提示趋势相反（P<0.05）;hsacirc0001831、hsacirc0004225表达无明显差异。其中circRNA8924差异倍数最高,表达水平与患者年龄、分化程度及淋巴结转移无关（P>0.05）;与肿瘤大小（P=0.008）、FIGO分期（P=0.041）、肌层浸润（P=0.022）显著相关。2.过表达circRNA8924稳转细胞系circRNA8924表达水平显著升高（P<0.001）,敲低circRNA8924稳转细胞系circRNA8924表达水平明显下调（P<0.05）。CCK-8实验显示,与对照组相比过表达组（circRNA8924 OE）SiHa及He La细胞增殖率均显著增高,差异具有统计学意义;而敲低组（sh-circRNA8924）Si Ha及HeLa细胞增殖率均降低（P<0.001）。流式细胞仪检测circRNA8924对宫颈癌细胞周期分布的影响:与对照组相比,过表达circRNA8924后宫颈癌细胞G0/G1期细胞比例减少,S期比例增加;敲低circRNA8924后G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例减少,差异具有统计学意义。划痕实验及Transwell侵袭实验表明:敲低组（shcircRNA8924）SiHa及HeLa细胞迁移能力及侵袭能力明显下降,过表达组（circRNA8924 OE）Si Ha及HeLa细胞迁移能力及侵袭能力显著增强（P<0.01）。3.qRT-PCR证实癌组织中miR-518d/519-5p的相对表达水平显著低于相应的癌旁组织（P<0.01）,且与circRNA8924表达呈负相关（R=-0.542,P=0.0017）;双荧光素酶实验表明:circRNA8924-WT与miR-519a-5p mimics共转染组荧光素酶活性度显著低于阴性对照组（P<0.01）,而circRNA8924-Mut与miR-519a-5p mimics共转染组荧光素酶活性与阴性对照组无明显改变;过表达circRNA8924后,miR-519a-5p表达水平相应降低（P<0.05）,而敲低circRNA8924后,miR-519a-5p表达水平显著升高（P<0.01）;CCK-8实验检测细胞增殖情况:过表达miR-519a-5p后,SiHa及HeLa细胞的增殖能力均得到抑制,差异具有统计学意义。circRNA8924 OE与miR-519a-5p mimics共转染组细胞的增殖能力则无明显差异;与对照组相比,转染miR-519a-5p mimics的SiHa及HeLa细胞阻滞于G0/G1期的比例增加,S期细胞比例减少,差异具有统计学意义,circRNA8924 OE与mi R-519a-5p mimics共转染组未见明显改变;过表达miR-519a-5p后,宫颈癌细胞迁移能力显著增强且在小室实验中的穿膜数多于对照组细胞（P<0.01）。circRNA8924 OE与miR-519a-5p mimics共转染组与对照组细胞相比,迁移能力与侵袭能力无显著差异;CBX8在宫颈癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）,且与miR-519a-5p的表达呈负相关（R=-0.447,P=0.011）,与circRNA8924的表达呈正相关（R=0.601,P=0.0007）;CBX8-WT与miR-519a-5p mimics共转染组荧光素酶活性度显著降低（P<0.01）,CBX8-Mut共转染组荧光素酶活性无明显改变;宫颈癌细胞转染sh-circRNA8924后CBX8 mRNA与蛋白表达水平均下降,下降趋势在mi R-519a-5p inhibitor参与后得到部分逆转,差异具有统计学意义。结论:1.circRNA芯片筛查宫颈癌患者癌组织与癌旁组织差异表达circRNAs,共发现591种潜在表达差异circRNA。其中circRNA8924在癌组织中表达明显上调,且与患者肿瘤大小、FIGO分期及肌层浸润显著相关。circRNA8924的表达情况与宫颈癌疾病进展密切相关,可作为宫颈癌的潜在标志物。2.circRNA8924能够显著促进宫颈癌细胞的增殖能力、迁移能力及侵袭能力,并干扰宫颈癌细胞的细胞周期,致使分裂期细胞比例明显增多。circNRA8924可通过增强宫颈癌细胞的恶性生物学行为,参与疾病的发生发展。3.miR-518d/519-5p家族在宫颈癌组织中低表达并发挥抑癌作用。circRNA8924可与miR-518d/519-5p家族结合且作为miRNA海绵发挥ceRNA作用。并首次证实CBX8为宫颈癌组织中显著上调的基因,可与miR-518d/519-5p家族靶向结合。circRNA8924通过竞争性抑制miR-518d/519-5p家族间接调节候选基因CBX8,从而影响宫颈癌细胞生物学行为,为宫颈癌发生发展机制提供了新思路。