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目的：本研究将体外合成的糖基化终末产物(advanced glycation end-products，AGEs)与人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast，HGF)共培养，观察AGEs对HGF凋亡及细胞内活性氧物质(reactive oxygen species，ROS)形成的影响。探讨AGEs在糖尿病加重牙周病变中的可能机制，并为糖尿病相关牙周炎的治疗开辟新的途径。
方法：①取第4代生长良好的HGF，胰酶消化后以3.5×105个/ml的密度等量接种于25cm2塑料培养瓶。当细胞长至相互融合时，分别与0μg/ml、50μg/ml、150μg/mlAGE-HSA共培养48h，收集各组细胞及其上清液，1200r/min，离心5min，加入500μl缓冲液后，Annexin-V/PI染色，流式细胞术检测AGE-HSA对HGF凋亡的影响。②取第4代生长良好的HGF，胰酶消化后以3.5×105个/ml的密度等量接种于25cm2塑料培养瓶。当细胞长至相互融合时，分别加入0μg/ml、50μg/ml、150μg/mlAGE-HSA培养48h，弃培养液后加入10μg/ml2，7-二氯荧光素二酯(2,7-dichlorofluorescin-diacetate，DCFH-DA)溶液2ml，避光反应45min，消化收集细胞，立即上机用FACScan进行流式细胞术定量检测荧光强度；③取第4代生长良好的HGF，胰酶消化后以3.5×105个/ml的密度等量接种子25cm2塑料培养瓶。当细胞长至相互融合时，实验组加入0.24mmol/L葛根素和50μg/mlAGE-HSA、对照组加入0mmol/L葛根素和50μg/mlAGE-HSA、空白组加入0mmol/L葛根素和0μg/mlAGE-HSA后共培养48h，收集各组细胞及其上清液，1200r/min，离心5min，加入500μl缓冲液后，Annexin-V/PI染色，流式细胞术检测葛根素对AGE-HSA介导HGF凋亡的影响。
结果：①结果显示：AGE-HSA与HGF复合培养48h后，各浓度组细胞凋亡率均高于对照组(p＜0.05)；并且随着浓度增加，总凋亡率逐渐升高(150μg/ml＞50μg/ml＞0μg/ml)，各浓度组间两两比较差异有统计学意义(p＜0.05)；50μg/mlAGE-HSA浓度组早期凋亡率显著高于150μg/ml浓度组，各浓度组间两两比较差异有显著性(p＜0.05)。②流式技术对细胞荧光强度检测结果显示：复合培养48h后，各实验组ROS所发射荧光强度均高于对照组(p＜0.05)，随AGE-HSA浓度增加，细胞荧光强度逐渐增强(150μg/ml＞50μg/ml＞0μg/ml)，各浓度组间两两比较差异有统计学意义(p＜0.05)。③结果显示：实验组，即葛根素、AGE-HSA和HGF复合培养组细胞凋亡率显著低于对照组(p＜0.05)；实验组细胞总凋亡率高于空白组，差异有统计学意义(p＜0.05)，早期凋亡率则与空白组无显著差异(p＞0.05)。
结论：①AGEs能促进HGF凋亡；②AGEs对HGF的凋亡诱导作用可能由氧化应激所介导；③葛根素具有一定的抗氧化能力，对AGEs介导的HGF凋亡具有保护作用。