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研究背景:Burkitt’s淋巴瘤是一种侵袭性极强的B细胞非霍奇金淋巴瘤,地高辛是强心苷药物的重要成员,近年发现地高辛具有抗肿瘤作用,但是地高辛对Burkitt’s淋巴瘤的作用尚缺乏研究报道。本研究将探讨地高辛对Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的作用及机制。研究方法:体外研究:地高辛处理Raji细胞:(1)显微镜下观察地高辛处理组及对照组Raji细胞形态;(2)CCK-8法检测细胞活性;(3)Click-iT(?)EdU法检测DNA 合成;(4)Cycle TESTrM PLUS DNA Reagent Kit 检测细胞周期;(5)吉姆萨染色观察凋亡细胞形态;(6)AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;(7)Western blot法检测p21cip1、cyclin D1、c-myc,以及caspase-3、-8、-9及其激活形式的蛋白含量,还有Bcl-2、Bax以及p65、p-p65、IκBα、p-IκBα的蛋白水平。体内研究:予BALB/c裸鼠皮下接种Raji细胞构建Burkitt’s淋巴瘤裸鼠移植瘤模型,成模后每日地高辛腹腔注射给药,每周两次测量裸鼠体重及移植瘤体积,给药后第21日处死裸鼠留取外周血涂片、移植瘤组织及重要脏器:(1)外周血涂片行瑞士-吉姆萨染色;(2)移植瘤组织及重要脏器组织切片行HE染色;(3)IHC检测重要脏器组织CD20表达;(4)IHC检测瘤组织CD20、Ki-67和c-myc的表达。研究结果:体外研究:地高辛作用Raji细胞后:(1)细胞聚团体积减小;(2)细胞的活性减低,具有时间和浓度依赖性;(3)抑制DNA合成;(4)细胞周期阻滞在G0/G1期;(5)吉姆萨染色示核膜破裂、染色质聚集和边聚;(6)早期和晚期凋亡细胞增多,以早期凋亡为主;(7)cyclin D1、c-myc蛋白水平减低,p21cip1蛋白含量增加;caspase-3及-9的活化形式增多,caspase-8的活化形式未见明显变化;Bcl-2/Bax的比值下降;p65的核浆分布减低,p65、p-p65及p-IκBα蛋白水平减低,IκBα蛋白含量增多,RelB的含量不变。体内研究:(1)地高辛抑制移植瘤体积的增长,对裸鼠的体重无明显影响;(2)裸鼠的外周血涂片以及重要脏器组织切片未查及CD20+Raji细胞侵润;(3)地高辛组移植瘤组织CD20、Ki-67及c-myc的表达较对照组的减低。研究结论:地高辛对Raji细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,作用机制可能与G0/G1期阻滞、细胞周期相关蛋白p21cip1、cyclin D1、c-myc的调控,caspase-3及-9的活性形式的增多、Bcl-2/Bax比值的下降,以及NF-κB经典信号通路的抑制相关。动物实验证明地高辛抑制Raji细胞在裸鼠体内生长,降低移植瘤组织Ki-67及c-myc蛋白水平。