【摘 要】
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榛属植物(Corylus)属于桦木科(Betulaceae),是重要的经济类坚果树种。大部分榛属植物存在自交不亲和现象,因此在种植栽培榛属植物时需要合理配置授粉品种,以确保良好的结实率。目前榛属植物的种质创新主要通过杂交育种途径,选择杂交亲本需要考虑其亲和性。所以研究榛属植物的自交不亲和机制对其丰产栽培和种质创新均具有极重要的意义。前人研究表明榛属植物(Corylus)属于孢子体自交不亲和(SSI
【基金项目】
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国家自然科学基金; 中国林科院基本科研业务费;
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榛属植物(Corylus)属于桦木科(Betulaceae),是重要的经济类坚果树种。大部分榛属植物存在自交不亲和现象,因此在种植栽培榛属植物时需要合理配置授粉品种,以确保良好的结实率。目前榛属植物的种质创新主要通过杂交育种途径,选择杂交亲本需要考虑其亲和性。所以研究榛属植物的自交不亲和机制对其丰产栽培和种质创新均具有极重要的意义。前人研究表明榛属植物(Corylus)属于孢子体自交不亲和(SSI)。SSI分子机制的研究在芸薹属(十字花科)中的研究较为透彻,而榛属植物(桦木科)SSI分子机制的研究进展缓慢。在本研究中,主要从细胞学和分子生物学的角度探索榛属植物的SSI机制。从细胞学的角度,进行了扫描电镜和荧光显微电镜实验,结果表明:平欧杂种榛(Corylus heterophylla×Corylus avellana)‘达维’在授粉0h、0.5h、1h后,亲和与自交不亲和授粉的柱头表面形态没有明显差异;但从授粉4h后,花粉管的形态出现明显的差异,在自交不亲和的柱头表面可观察到有许多花粉管出现扭曲、打结等不正常的状态;而亲和授粉的柱头表面可观察到花粉管穿透乳突细胞,进入柱头;并且结合两种电镜实验确定了花粉与柱头发生了水合作用的时间在授粉后0.5h内。从分子生物学的角度分析榛属植物的SSI机制。首先利用前人在转录组中获得的榛属植物两个SRK候选基因和RACE克隆技术,克隆了两个平欧杂种榛SRK基因,分别命名为Cha SRK1和Cha SRK2基因,利用生物信息学方法对两个基因进行了序列和结构域分析。Cha SRK1 c DNA全长为2883 bp,其中CDS为2547 bp,编码848个氨基酸。Cha SRK2c DNA全长为2693 bp,其中CDS为2438 bp,编码811个氨基酸。Cha SRK1/2蛋白含有一个S结构域(胞外区)、一个跨膜区、一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性位点(激酶结构域)以及DUF3660和/或DUF3403结构域;另外通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和双色荧光原位杂交(Dual-color FISH)分析了Cha SRK1/2基因表达模式。q RT-PCR分析结果表明:Cha SRK1和Cha SRK2的在组织中表达不完全一致:Cha SRK2主要在成熟的雌蕊柱头中高表达,而Cha SRK1在其它组织中也有表达,并且在根尖中表达量较高。双色荧光原位杂交结果表明:Cha SRK1/2均在柱头于乳头细胞中表达,但Cha SRK2在柱头中的表达量比Cha SRK1高;通过设计兼并引物,在不同种和品种中克隆SRK基因的同源基因。从4个平欧杂种榛、4个欧洲榛子和1个平榛中,扩增得到18条SRK等位基因,所有SRK基因的S区域长度在1347bp~1451bp之间。它们与Cha SRK1或Cha SRK2具有相同的蛋白结构域。通过构建系统发育树,分析榛属植物SRK基因与其它物种SRK同源基因的亲缘关系,所有榛属植物SRK基因分为两类/两组,与芸薹属SRK基因的分类情况一致,但是榛属植物SRK基因与芸薹属SRK基因分别聚在两个不同的分支上。以上结果揭示了榛属植物SSI机制与芸薹属的SSI机制,在授粉后花粉管的表观形态、SRK基因的表达模式和其分类有相似的特征。因此,本文推测榛属的SSI机制可能更类似于芸薹属的SSI机制,而不是其它SSI类型。
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