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猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis, TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起猪的一种以严重腹泻,呕吐和脱水为主要临床症状的高度接触性传染病。该病对2 周龄以内的仔猪具有高度致病性,致死率高达100%,是威胁养猪业发展的重要传染病。快速准确的诊断和有效免疫预防是本病防治的主要内容。S 基因所编码的S 蛋白是唯一诱导机体产生中和抗体的结构蛋白。因此,该基因的表达及表达产物的研究,对TGE 特异性免疫预防及准确诊断具有重要意义。本研究根据已发表的TGEV S 基因cDNA 序列,利用Primer5.0 软件设计并合成了一对TGEV S 基因引物,通过PCR 扩增出含A、D 位点的S1 基因,将S1 克隆到pMD18-T 载体上,构建了重组质粒pMD18-T-S1。对pMD18-T-S1进行鉴定后,将S1基因亚克隆至pMel-Bac C真核表达载体的HindIII和BamHI之间的多克隆位点上,命名为重组表达载体pMel-Bac C-S1。将其与线性杆状病毒DNA Bac-N-Blue 共转染Sf9 昆虫细胞,通过三轮蚀斑筛选,获得了重组杆状病毒。用SDS–PAGE 和Western–blot 分析表达产物。结果表明:S 基因在杆状病毒表达系统中获得表达,表达的重组蛋白约为37kDa,光密度扫描对表达产物进行初步定量,表明重组蛋白约为菌体总蛋白的8.3%。间接ELISA 检测表明抗TGEV 全血清可与目的蛋白发生特异性反应,说明目的蛋白具有良好的反应原性,用目的蛋白免疫的血清可与全病毒发生特异性反应,说明目的蛋白具有良好的免疫原性。本研究将TGEV S 基因在昆虫杆状表达系统中表达,为更深入地进行TGEV 分子生物学特性及TGEV S 蛋白A,D 抗原的基础性研究奠定了基础。