一、骨髓基质干细胞诱导成骨细胞与肾血管内皮细胞直接共培养的体外实验研究 目的 本实验研究旨在培养骨髓基质干胞(BMSCs)诱导的成骨细胞和肾血管内皮细胞作为组织工程的种子细胞,鉴定其生物学特性,并将二者直接共培养,以观察两种细胞直接接触是否具有良好的细胞相容性,并探索二者共培养的合适比例。 方法 抽取兔骨髓,通过离心法获取骨髓基质干细胞,经条件培养基培养获得成骨细胞;采用三步梯度筛网肾血管球外植法获得肾微血管内皮细胞;两种细胞按不同比例直接共培养,观察细胞形态,计数细胞比较增殖能力,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,研究共培养后成骨细胞成骨能力的改变。 结果 BMSCs可在条件培养液诱导下分化为成骨细胞,经鉴定碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性;从细胞的生长增殖情况看,共培养细胞增殖快于单一细胞培养,成骨细胞与内皮细胞按2:1比例培养的优于按3:1和1:1比例培养,增殖最快;从成骨细胞ALP染色阳性率看,和血管内皮细胞共培养的成骨细胞染色阳性率比单纯成骨细胞高,其中成骨细胞与内皮细胞按2:1比例培养优于按3:1和1:1比例培养,阳性率最高,表明血管内皮细胞能够显著增强成骨细胞的ALP活性。 结论 骨髓基质干细胞在体外可定向诱导为成骨细胞;BMSCs诱导的成骨细胞和肾血管内皮细胞体外直接共培养具有良好的相容性,可促进成骨细胞的增殖和分化,并促进ALP的分泌,同时提高成骨细胞的成骨能力;二者按2:1混合是较佳比例。