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T细胞因子4 (T cell factor-4, TCF-4)属于TCF基因家族的一员,是Wnt信号通路的关键因子,作为该信号通路的核内信号分子,在该通路调控转录过程中起着分子“开关”的双重作用(转录激活或转录抑制)。目前已鉴定多个受TCF-4调控的靶基因,这些基因的功能涉及细胞周期、细胞增殖、凋亡以及细胞粘附等多个方面。本研究通过在体外培养的阿尔巴斯绒山羊初级、次级毛乳头细胞中过表达和敲减TCF-4基因,探讨TCF-4基因对绒山羊初级、次级毛乳头细胞的作用与影响。1.TCF-4过表达载体及shRNA干扰载体的构建首先克隆了阿尔巴斯绒山羊的TCF-4的基因cDNA序列,然后构建了TCF-4基因过表达载体与干扰载体。TCF-4过表达载体由CAG启动子、TCF-4、polyA片段、CMV启动子和DsRed2组成：CAG启动子可以高效启动下游目的基因的表达,CMV-DsRed2元件可以使转基因细胞发出红色荧光,从而判断TCF-4的表达情况。针对TCF-4基因cDNA序列信息,同时设计构建三种TCF-4干扰载体和一种无义序列对照载体,用于TCF-4基因敲减。2.TCF-4过表达对初级、次级毛乳头细胞发育相关基因表达的影响利用脂质体介导的方法将TCF-4过表达载体转染体外培养的绒山羊初级、次级毛乳头细胞,并检测两种毛乳头细胞中毛囊发育相关基因的表达变化。结果发现在初级毛乳头细胞中TCF-4蛋白的上调可以引起PI3K、β-catenin表达量不同程度的上升,AKT、GSK-3β表达量无明显变化；次级毛乳头细胞中TCF-4蛋白的上调可以引起PI3K、β-catenin、AKT表达量不同程度的上升,GSK-3β表达量下降。3.TCF-4敲减对初级、次级毛乳头细胞发育相关基因表达的影响利用脂质体介导的方法将TCF-4干扰载体与对照载体分别转染绒山羊初级、次级毛乳头细胞,提取细胞RNA,通过荧光定量PCR技术筛选有效干扰载体,发现shRNA-1抑制效率最高,用于后续实验。然后检测TCF-4基因敲减后毛囊发育相关基因的表达变化,结果发现在初级毛乳头细胞中TCF-4的下调可以引起PI3K、β-catenin表达量不同程度的下降,AKT表达量无明显变化,GSK-3β表达量上升。次级毛乳头细胞中TCF-4蛋白的下调可以引起PI3K、β-catenin、 AKT表达量不同程度的下降,GSK-3β表达量上升。上述结果对进一步了解TCF-4对毛乳头细胞生物学作用,以及毛囊发育和周期性生长过程中调控机制提供了实验依据。