论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)主要引起母猪的繁殖障碍，给各国养猪业造成了巨大的经济损失。目前对PRRS的防治尚无切实有效的方法，主要采取疫苗免疫接种和综合防治相结合的方法。用于该病防制的疫苗主要是灭活苗和弱毒苗。但灭活苗主要引起体液免疫，而猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)具有抗体依赖性增强作用(ADE)，因此在PRRS防治上受到一定的限制。而弱毒苗主要是在安全方面存在一定的问题，例如在接种弱毒疫苗后造成经胎盘感染胎儿等，对繁殖性能造成不利影响，精液带毒和精液质量下降现象，还可能造成疫苗毒的传播，引起PRRSV的持续感染和病毒血症，有些猪群出现急性PRRS样综合症状。所以对弱毒疫苗在推广使用前必须进行大量全面的试验研究。因此对PRRS等免疫抑制性疾病的防制，常规疫苗不能起到较好的效果。由于核酸疫苗可同时诱导细胞免疫和体液免疫，可以对不同血清型的毒株产生交叉保护性，因此核酸疫苗有望成为重要研究方向。本研究首先根据已发表的PRRSV国内分离株HB-1株的核苷酸序列，设计了引物，用RT-PCR的方法扩增了PRRSV长春分离株ORF6、ORF5两个重要的免疫原性基因，经凝胶电泳回收后克隆到pMD-18T载体上，经酶切鉴定后进行序列测定。序列分析表明PRRSV长春分离株与标准美洲株的核苷酸与氨基酸同源性较高，ORF6基因核苷酸序列的同源性达95.4％，ORF5基因核苷酸序列的同源性达89.6％；ORF6基因氨基酸序列的同源性达97.1％，ORF5基因氨基酸序列的同源性达89.1％。表明PRRSV长春分离株属于美洲型。将ORF6基因克隆至真核表达载体pVAX1上，构建重组质粒pVAX1-ORF6。辅以超抗原SEA构建了含内源性佐剂的重组质粒pVAX1-SEA-ORF6，同时将ORF6、ORF5基因串联构建了重组质粒pVAX1-SEA-ORF6-ORF5，将构建的三种重组质粒转染BHK-21细胞，通过IFA，RT-PCR检测方法表明，所构建的3个重组质粒能在真核细胞中进行有效的转录，并表达了目的蛋白(M)、(GP5)。综上所述，本试验成功构建了表达ORF6、ORF5基因的PRRS核酸疫苗。为新型PRRS疫苗的研究奠定了基础，并提供科学依据。