论文部分内容阅读
目的:观察养血补肾方对实验性高度近视眼巩膜组织中的MMP-2、TIMP-2、TGF-β及其视网膜p-Stat3表达变化的影响,为本方治疗高度近视眼提供相关实验依据。方法:取2周龄健康的豚鼠,用半透明眼罩行右眼遮盖60天(d)制备形觉剥夺性近视模型,将造模成功的豚鼠随机分为对照和治疗2组,并测量豚鼠造模前后双眼的屈光度(D)和眼轴(L)。治疗组给予养血补肾方水煎液(生药量12.7 g/kg)连续灌胃21 d,每天一次,对照组不进行干预。采用HE染色法观察巩膜及其视网膜组织形态学变化,同时应用透射电镜技术观察巩膜组织的超微结构,采用免疫组化、Western-blotting等方法检测巩膜MMP-2、TIMP-2、TGF-β及其视网膜p-Stat3的表达变化。结果:半透明眼罩遮盖豚鼠右眼60d后成功制备实验眼剥夺性近视模型,与自身对照眼相比屈光度明显增加,剥夺前屈光度为3.924±3.392 D,剥夺后-2.583±2.954,差异有统计学意义P=0.001(P<0.05)。造模前右眼(形觉剥夺眼)眼轴平均长度为(7.557±0.176)mm,造模后右眼眼轴平均长度为(8.278±0.250)mm,眼轴长度明显增加,差异具有统计学意义P=0.01(P<0.05)。与对照组相比,治疗组灌胃21 d后,豚鼠巩膜组织形态明显改善,透射电镜观察表明对照组和治疗组巩膜胶原均为I型胶原,对照组模型眼巩膜胶原纤维分布稀疏,纤维直径未见明显改变,未见典型凋亡细胞。治疗组模型眼巩膜胶原纤维排列相对致密,纤维间空隙轻度增大。由治疗组模型眼较对照组对照眼的胶原直径变小,对照组的模型眼巩膜胶原纤维间空隙较对照眼轻度增大,对照组模型眼较对照组对照眼细胞外基质明显增多,内质网扩张。MMP-2和TIMP-2在各组豚鼠眼巩膜中均有微弱表达,遮盖后MMP-2表达相比遮盖前上调;遮盖后TIMP-2表达相比遮盖前下调;TGF-β在各组豚鼠眼巩膜中均有微弱表达,遮盖后TGF-β表达相比遮盖前下调;p-Stat3在未遮盖豚鼠眼视网膜中有微弱表达,遮盖后p-Stat3表达相比遮盖前上调;说明巩膜中MMP-2、TIMP-2、TGF-β及其视网膜p-Stat3蛋白均参与了实验性近视的形成。结论:建立高度近视动物模型,初步探讨巩膜组织在高度近视发生发展的病理机制,遮盖可以导致豚鼠形觉剥夺性近视眼形成、眼轴延长;MMP-2和TIMP-2在各组豚鼠眼巩膜中均有微弱表达,遮盖后MMP-2表达相比遮盖前上调;遮盖后TIMP-2表达相比遮盖前下调;TGF-β在各组豚鼠眼巩膜中均有微弱表达,遮盖后TGF-β表达相比遮盖前下调;p-Stat3在未遮盖豚鼠眼视网膜中有微弱表达,遮盖后p-Stat3表达相比遮盖前上调;说明巩膜中MMP-2、TIMP-2、TGF-β及其Stat3信号通路均参与了实验性近视的形成和发展。养血补肾方能够明显改善豚鼠形觉剥夺性近视眼巩膜组织的形态,可以下调MMP-2、TGF-β等因子的变化,上调TIMP-2的变化,但对视网膜p-Stat3蛋白的表达变化无影响,提示养血补肾方可能通过下调MMP-2、TGF-β,上调TIMP-2来发挥对近视眼巩膜细胞凋亡的抑制作用。