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目的:本研究以PI3K/Akt和TLR4/NF-κB信号通路为靶标,探讨壮药天胡荽单体活性成分异牡荆素（Isovitexin）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的抑制作用及其机制。方法:将HSC-T6细胞分为6组:正常对照组、模型组（20μg/L PDGF-BB）、阳性药组（20μmol/l LY294002）、异牡荆素高、中、低剂量组（120、60、30μmol/l Isovitexin）。按照实验分组对细胞进行相应处理,随后进行以下实验:1.Isovitexin对HSC-T6细胞增殖的影响CCK-8法检测Isovitexin对HSC-T6细胞的毒性,然后检测Isovitexin对HSC-T6细胞增殖活化的影响;此外,试剂盒检测Isovitexin对HSC-T6细胞ALT、AST活性的影响。2.Isovitexin对HSC-T6细胞炎症的影响ELISA试剂盒检测Isovitexin对HSC-T6细胞炎症因子IL-1β、TNF-α生成水平的影响,评估Isovitexin在炎症反应中的作用。3.Isovitexin对HSC-T6细胞凋亡的影响AO/EB实验观察Isovitexin对HSC-T6细胞凋亡形态学的影响;流式细胞术检测Isovitexin对HSC-T6细胞凋亡率的影响;Western blot实验检测Isovitexin对HSC-T6细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的影响。4.Isovitexin对HSC-T6细胞内胶原沉积的影响Western blot实验检测Isovitexin对HSC-T6细胞内α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ胶原相关蛋白的表达情况,并且也检测细胞内金属基质酶MMP-2和TIMP-1蛋白的表达情况。5.Isovitexin对HSC-T6细胞PI3K/Akt信号通路蛋白的影响Western blot实验检测细胞内PI3K/Akt通路相关蛋白Akt、PI3K、m-TOR和P70S6K的表达及其磷酸化水平的表达情况;RT-q PCR检测Akt、PI3K m RNA表达,评估Isovitexin对HSC-T6细胞PI3K/Akt信号通路的调控作用。6.Isovitexin对HSC-T6细胞TLR4/NF-κB信号通路蛋白的影响Western blot实验检测细胞内TLR4/NF-κB通路相关蛋白p-NFκBp65、NF-κBp65、TLR4、My D88的表达水平,探究Isovitexin对HSC-T6细胞的潜在的保护作用机制,RT-q PCR检测NFκBp65m RNA的表达。结果:1.Isovitexin能有效抑制HSC-T6细胞增殖CCK-8实验结果经过SPSS计算得出Isovitexin对HSC-T6细胞作用的24h的IC50为180.65μmol/l;而细胞增殖实验显示,20μg/L PDGF-BB刺激明显促进HSC-T6细胞增殖（P<0.05）,Isovitexin对HSC-T6细胞进行干预后,HSC-T6细胞增殖受到了不同程度的抑制,随着药物浓度增加,抑制效果也相应增加;此外,生化试剂盒检测HSC-T6细胞ALT、AST释放结果显示,模型组中可见大量的ALT、AST释放,Isovitexin治疗可明显抑制ALT、AST的释放。2.Isovitexin能抑制HSC-T6细胞炎症反应ELISA实验结果显示,PDGF-BB刺激可以促进HSC-T6细胞内IL-1β、TNF-α的释放增加,而Isovitexin能有效的抑制这些炎症因子的释放。表明,Isovitexin可以通过减少炎症因子的生成从而抑制炎症反应的进一步发生。3.Isovitexin能明显诱导HSC-T6细胞凋亡,减少肝细胞受损AO/EB结果显示,PDGF-BB刺激对HSC-T6细胞凋亡无明显影响。Isovitexin处理组能够明显促进活化的HSC-T6细胞凋亡,且随着给药浓度的增加,促进凋亡作用也明显增强（P<0.05）;流式细胞术检测细胞凋亡率也显示出了相似的结果;Western blot实验结果显示,Isovitexin能显著上调Bax、Caspase 3/8/9的表达水平,抑制Bcl-2的表达（P<0.05）。表明,Isovitexin可能通过调控凋亡相关蛋白表达,抑制HSC-T6细胞活化,促进细胞凋亡,从而起到抗肝纤维化的作用。4.Isovitexin能显著抑制HSC-T6细胞内胶原生成、沉积Western blot实验结果显示,相对于正常对照组,20μg/L PDGF-BB刺激后,HSC-T6细胞内α-SMA、Collagen-I和Collagen-Ⅲ蛋白表达明显增加（P<0.05）,而经过Isovitexin治疗之后,α-SMA、Collagen-Ⅰ和Collagen-Ⅲ蛋白的表达量显著下降（P<0.05）。此外,Western blot检测金属基质酶MMP-2和TIMP-1的结果显示,PDGF-BB组中TIMP-1的蛋白水平显著升高（P<0.05）,TIMP-1与正常对照组比较无明显区别,而Isovitexin治疗后,TIMP-1的表达被显著抑制,MMP-2表达显著上调（P<0.05）。表明,Isovitexin能够抑制HSC-T6细胞内胶原生成,减少细胞外基质的过度沉积,这是治疗肝纤维化的药理学基础。5.Isovitexin能显著抑制HSC-T6细胞PI3K/Akt信号通路蛋白的表达Western blot实验结果显示,与正常对照组比较,PDGF-BB组中Akt、PI3K、m-TOR和P70S6K的磷酸化表达水平显著升高（P<0.05）,而经过Isovitexin干预后,这些蛋白的表达被显著下调（P<0.05）。此外,RT-q PCR实验结果也显示,Akt、PI3K m RNA在PDGF-BB组中显著升高,而Isovitexin干预可以显著抑制这些基因的表达（P<0.05）。表明,Isovitexin抑制HSC-T6细胞活化作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路蛋白有关。6.Isovitexin能显著抑制HSC-T6细胞TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达Western blot实验结果显示,与正常对照组比较,PDGF-BB组中NF-κBp65的磷酸化表达水平及TLR4、My D88蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）,而经过Isovitexin干预后,这些蛋白的表达被显著下调（P<0.05）。此外,RT-q PCR实验结果也显示,NF-κBp65 m RNA在PDGF-BB组中显著升高,而Isovitexin干预可以显著抑制其基因的表达（P<0.05）。提示,Isovitexin抑制HSC-T6细胞活化作用可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路蛋白有关。结论:Isovitexin能明显抑制HSC-T6细胞的增殖活化,其作用可能是由于:（1）Isovitexin调节凋亡相关蛋白,诱导HSC-T6细胞凋亡;（2）Isovitexin抑制胶原生成以及细胞外基质的过度沉积;（3）Isovitexin抑制PI3K/Akt、TLR4/NF-κB信号通路活化。