【摘 要】
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目的:前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤,去势抵抗是进展期最重要的临床特征。在转移性去势抵抗前列腺癌（m CRPC）中,全基因组测序证实肿瘤抑癌基因RB1和TP53变异频率较高,并且对多种癌症治疗剂均具有抵抗力。因此,阐明RB1和TP53在前列腺癌进展中的作用机制可能为去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的临床治疗提供新策略。方法:运用慢病毒干扰载体（sh RNA）靶向沉默前列腺癌细胞RB1基因;通过CC
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目的:前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤,去势抵抗是进展期最重要的临床特征。在转移性去势抵抗前列腺癌（m CRPC）中,全基因组测序证实肿瘤抑癌基因RB1和TP53变异频率较高,并且对多种癌症治疗剂均具有抵抗力。因此,阐明RB1和TP53在前列腺癌进展中的作用机制可能为去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的临床治疗提供新策略。方法:运用慢病毒干扰载体（sh RNA）靶向沉默前列腺癌细胞RB1基因;通过CCK8、EDU、β-半乳糖苷酶染色、流式细胞等实验检测RB1缺失对前列腺癌细胞的影响;利用慢病毒双敲低实验、蛋白稳定性实验、磷酸化特异性抑制剂及免疫荧光实验证实RB1与TP53之间的作用关系;使用雄激素受体拮抗药物Enzalutamide检测RB1与TP53缺失后对细胞生长的影响,同时运用q RT-PCR、Western Blot及免疫荧光实验分析RB1与TP53缺失促进去势抵抗的潜在机制;利用RNA测序分析RB1与TP53缺失的前列腺细胞基因表达差异,并通过富集分析、靶基因干预等实验明确RB1与TP53缺失促进细胞生长的分子靶点。结果:体外实验证实RB1急性缺失增加前列腺癌细胞DNA损伤积累,并通过TP53依赖的方式促进细胞衰老;而且RB1急性缺失通过ATM介导MDM2 ser395位点磷酸化调节TP53蛋白稳定性。然而,RB1与TP53双缺失逆转DNA损伤诱导的细胞衰老,并促进前列腺癌细胞增殖及降低细胞对Enzalutamide药物的敏感性,同时减少雄激素受体基因表达并促进神经内分泌标记SYP和NSE基因表达。此外,RB1/TP53缺失导致前列腺癌细胞大量基因表达上调,富集分析证实上调基因参与低氧反应、细胞干性及表观调控、DNA损伤反应等,并且依赖DNA修复基因PARP1促进细胞增殖。然而,PARP1抑制剂Olaparib显著抑制RB1/TP53缺失的前列腺癌细胞生长。结论:肿瘤抑癌基因RB1与TP53通过调控DNA损伤反应共同维持前列腺癌细胞基因组稳定;RB1联合TP53缺失增加前列腺癌细胞对DNA修复基因PARP1抑制剂的脆弱性。
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