[目 的]新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-Ischemic Encephalopathy,HIE）不仅会导致新生儿围产期死亡,并且也是新生儿后期病残的常见病因之一。随着我国二胎政策的开放,孕妇生育年龄渐增,HIE的发病率很可能进一步提升。约45%的重度HIE患儿在发育早期便可观察到明显的神经行为异常（如脑瘫、癫痫等）。轻症患儿即便在早期被认为治愈,但往往在学龄期、青春期逐渐出现神经行为问题,自闭症、注意力缺陷、精神分裂症等。患儿的认知功能损伤和社交行为障碍,给家庭和社会带来了沉重的负担。既往研究显示,NMDA受体（N-methyl-D-aspartate Acid Receptor,NMDAR）参与了缺氧缺血引起的兴奋性毒性,但其不同亚型在HIE中的作用及机制并不清楚。本课题希望通过研究NMDA受体不同亚型在新生儿缺氧缺血损伤及保护中的作用机制,探索新生儿与成人缺氧缺血损伤的病理差异,为临床上干预新生儿缺氧缺血损伤提供新的基础理论依据。[方 法]采用改良的Vannucci法建立新生C57小鼠9-11天的缺氧缺血（HIE）模型,随机分成正常对照组、假手术组、HIE组和药物处理组。其中药物处理组进一步分为三组,分别给予GluN2A的特异性抑制剂TCN-201和GluN2B的特异性抑制ifenprodil。设置三个给药时间点,分别为HIE造模前,缺氧后,及造模后24小时。如上共分12组（每组n=5）,在造模后72h取小鼠脑,使用TTC（2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride）染色检测脑梗死面积的情况,Hoechst染色检测造模及给药后细胞的凋亡情况,Western Blot检测给药后两条重要信号通路相关蛋白（GluN2A、GluN2B、Akt、ERK、caspase3、cleaved caspase3）和突触内保护通路（PI3K、CREB、GSK）的表达情况及磷酸化改变。从而明确NMDA受体不同亚型在HIE中的功能,及其相关联信号通路。之后,为进一步探索GluN2B介导神经元保护的分子机制,使用免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation,CO-IP）检测造模后 GluN2B 与 PSD95 的相互作用情况。通过给予穿膜干扰多肽TAT-GluN2B-9c干扰GluN2B和PSD95相互作用,使用CO-IP检测干扰效果。将小鼠随机分成假手术组、造模组、生理盐水组、干扰多肽组,共4组（每组n=4）,分别在术后24h、72h取材,免疫共沉淀检测给药后GluN2B与PSD95的相互作用变化,Western Blot检测保护信号通路中蛋白（PI3K、p-PI3K、CREB、p-CREB、Akt、p-Akt）的表达变化。最后,使用悬挂实验（每组n=4-5）检测HIE后8周小鼠的运动功能。[结 果]①幼龄小鼠缺氧缺血造模后,脑中出现明显的白色梗死灶,神经细胞凋亡显著增加,提示造模成功。②Western blot结果显示,缺氧缺血引起小鼠NMDA受体的GluN2A亚基表达下调,GluN2B亚基的表达量无显著改变。同时,Akt和ERK的磷酸化水平显著下调。③在给予ifenprodil特异性抑制含GluN2B的NMDA受体（GluN2B-NMDAR）后,Hoechst实验显示细胞凋亡加剧。Western blot结果显示,与造模组相比,ienprodil处理组小鼠脑中Akt磷酸化水平显著降低,同时,caspase3和cleaved caspase3的表达水平显著升高,提示神经元凋亡加剧。抑制GluN2A-NMDAR后未见明显改变。④HIE造模后小鼠PI3K和CREB的磷酸化水平升高。此外,ifenprodil处理组小鼠PI3K和CREB的磷酸化与造模组相比显著下调。抑制GluN2A-NMDAR后未见明显改变。⑤在HIE后24小时至72小时,GluN2B与PSD95的相互作用显著增加,而干扰多肽GluN2B-9c可有效抑制GluN2B与PSD95的结合。⑥抑制GluN2B与PSD95相互作用后,小鼠脑中的Akt,PI3K,CREB的磷酸化水平较HIE造模组小鼠均显著下调,而生理盐水组小鼠的三种蛋白的磷酸化水平均与HIE组无显著差异。⑦HIE造模组、ifenprodil处理组小鼠的行为学实验评分较对照组显著降低。此外,和造模组相比,多肽处理组小鼠的行为学评分较高,提示多肽对远期行为有矫正作用。[结 论]①HIE造模小鼠的脑损伤明显,细胞凋亡加剧,NMDA受体的GluN2A表达显著下调,此外神经元凋亡相关信号通路被激活。②GluN2B-NMDAR在HIE所致神经元凋亡中,偶联突触保护信号通路,降低神经元凋亡。③PSD95介导了 GluN2B-NMDAR的保护作用。干扰二者结合将加剧HIE所致神经元凋亡,但是对远期行为损伤有矫正作用。