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目的本研究探讨反应性氧物质（Reactive Oxygen Species, ROS）是否参与转化生长因子（TGF-β1）诱导的c-Jun N末端激酶（C-jun N-teminal kinase, JNK）通路的激活，刺激肺成纤维细胞（Pulmonary Fibroblasts，PF）增殖和胶原合成，从而促进矽肺纤维化；及利用新型过氧化物酶Peroxiredoxin I（Prx-1）对ROS的清除作用，观察Prx-1是否可通过消除ROS来抑制TGF-β1的这种促纤维化作用，为Prx-1成为防治矽肺的新靶点提供一定的实验依据。方法人胚肺成纤维细胞（MRC-5），常规培养，同步化后，给与细胞TGF-β1(5μg/L)刺激，分别于刺激后0min、30min、60min、3h、24h、48h提取细胞总蛋白，用western blot检测TGF-β1对人胚肺成纤维细胞Prx-1蛋白表达的影响。随后，人胚肺成纤维细胞经常规培养、同步化，随机分为四组：正常对照组、TGF-β1组、阴性siRNA组和Prx-1siRNA组，其中正常对照组中加入含0.4%血清的MEM，而TGF-β1组、阴性siRNA组和Prx-1siRNA组的细胞则给予5μg/L TGF-β1培养，且阴性siRNA组和Prx-1siRNA组的细胞预先利用lipofectamine2000分别成功转染阴性干扰siRNA序列和Prx-1siRNA片段。利用激光共聚焦显微镜观察siRNA片段是否成功进入人胚肺成纤维细胞，并用Real time PCR检测各组siRNA片段转染后Prx-1mRNA的表达情况，以检测基因封闭情况。各组细胞经或未经TGF-β1刺激不同时间后，利用MTT法检测各组细胞的增殖情况；Westernblot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、Prx-1、JNK及磷酸化（Phospho-JNK，p-JNK）蛋白的表达情况；免疫荧光细胞化学法分别检测各实验组成纤维细胞中DNA氧化损伤的特异性产物8-OHdG表达情况。结果1.TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞Prx-1蛋白表达增强，在刺激30min时Prx-1蛋白的表达即有所增加，随着时间的延长表达也越发明显，在刺激3h时达高峰，随后下降但仍高于对照组。2.阴性siRNA组和Prx-1siRNA组的细胞经羧基荧光素（FAM）标记的阴性干扰siRNA和Prx-1siRNA转染16h后，细胞内均可有绿色荧光表达，散在分布于细胞浆，说明siRNA被成功转染入细胞内，其中以siRNA:脂质体=5:5转染效率最高，转染入胞达到80%左右；另外Real time PCR结果显示，与未转染组比较，三组Prx-1siRNA：Prx-1siRNA (209)、Prx-1siRNA(289)和Prx-1siRNA (453)，均可成功降低Prx-1mRNA的表达，而阴性siRNA则无此作用，Prx-1siRNA (209)、Prx-1siRNA (289)和Prx-1siRNA (453)对Prx-1mRNA的抑制效率分别为86%、74%和95%，根据抑制效率最终选取Prx-1siRNA(453)用于本实验。3.Western blot结果显示，与对照组比较，TGF-β1刺激了人胚肺成纤维细胞Prx-1蛋白的表达增强，但与TGF-β1组比较，阴性转染组的Prx-1蛋白表达无明显变化而Prx-1siRNA组却无明显条带出现，说明Prx-1siRNA可使TGF-β1激活的Prx-1基因被沉默。4.与对照组比较，TGF-β1刺激了人胚肺成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的增强，但与TGF-β1组比较，阴性转染组的细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达无明显变化而Prx-1siRNA组的变化却进一步明显，说明Prx-1对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原增加具有促进作用。5.免疫荧光细胞化学结果显示，与对照组相比，TGF-β1刺激了人胚肺成纤维细胞8-OHdG水平的表达，但与TGF-β1组比较，阴性siRNA组的8-OHdG水平无明显变化，而Prx-1siRNA组则进一步明显增加，说明Prx-1基因沉默对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞ROS的生成具有促进作用。6.各实验组细胞总JNK的表达无明显差别；与对照组比较，TGF-β1刺激了人胚肺成纤维细胞p-JNK水平的增加，但与TGF-β1组比较，阴性siRNA组的p-JNK水平无明显变化而Prx-1siRNA组的则进一步明显升高，说明Prx-1基因沉默对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞JNK磷酸化具有促进作用。结论TGF-β1能够诱导人胚肺成纤维细胞生成ROS，并由此促进JNK的激活，最终导致细胞增殖、I和III型胶原合成增加，而Prx-1基因沉默则可通过增加ROS水平进一步促进TGF-β1的这种作用。