随着胚胎工程技术的推广应用，牛活体采卵及体外受精技术成为解决体外生产胚胎紧缺的有效途径。但目前的研究还不能达到产业化体外生产牛胚胎的目的，故本研究针对牛活体取卵技术获取卵母细胞数量少，质量差等特点，旨在建立适合活体取卵技术的微滴培养技术，以及从五个方面优化体外培养体系，为体外高效生产牛胚胎研究奠定基础。本文以屠宰场牛卵巢为材料，采用体外成熟、体外受精、早期胚胎的体外培养等方法，研究了不同体积的受精液及不同早期胚胎培养液体积对体外受精分裂率及囊胚率的影响，同时还研究了微滴培养使用处理石蜡油覆盖受精液滴和早期胚胎培养液对体外受精的影响。结果表明：不同体积的受精液70μl和150μl体外受精后卵裂率(67．2％、64．2％)、囊胚率(25．4％、24．3％)差异均不显著(P>0．05)，但显著优于对照组：体积为70μl的受精液覆盖与不覆盖石蜡油其分裂率(59．3％、70．3％)差异显著(P<0．05)，囊胚率(27．1％、21．4％)差异不显著(P>O．05)，但二者均显著优于对照组；受精使用70μl覆盖石蜡油，其早期胚胎培养使用200μl培养液覆盖与不覆盖处理石蜡油，结果分裂率(72．3％、70．5％)差异不显著(P>O．05)，囊胚率(33．2％、22．3％)差异显著(P<0．05)，且结果显著优于对照组，故少量卵母细胞的体外培养应使用覆盖处理石蜡油的微滴培养，可获得良好的培养效果。在覆盖物的选择上，石蜡油的效果显著优于矿物油(P<0．05)，新石蜡油与反复使用的处理石蜡油效果差异不显著(P>0．05)。本文利用以上建立的微滴培养方法，为优化体外培养体系，探讨了从不同状态卵巢所获卵母细胞、种公牛精液、受精时间、季节及共培养对体外培养结果的影响。结果表明：(1)不同卵巢状态所获卵母细胞培养后，分裂率、囊胚率差异均不显著(P>0．05)；(2)不同种公牛精液进行体外受精，结果显示分裂率和囊胚率差异显著(P<0．05)，受精前有必要对精液的受精力进行测定，确保体外培养的精液的质量；(3)以6h、8h、12h、16h的受精时间分别进行体外培养，结果以12h效果最佳，分裂率、囊胚率与其它各组差异均显著(P<0．05)，表明受精时间以12h左右为宜；(4)季节对体外培养的影响，以春、秋季效果显著优于夏、冬季(P<0．05)；(5)使用颗粒单层对分裂率无明显的影响，但可显著提高囊胚率(P<0．05)。