猪球虫病是寄生于猪肠道上皮细胞的艾美耳属球虫和等孢属球虫引起,以腹泻和消瘦为主要症状。国内外报道的猪球虫种类较多,经形态学和特异PCR方法鉴定,目前有10种艾美耳球虫和1种等孢球虫被确认为有效种。不同品种和生长阶段的猪均能感染猪球虫,其中哺乳期仔猪对猪等孢球虫(Isospora suis)的易感性最高,临床常出现水样腹泻,而其他阶段的猪则多为隐性感染。猪等孢球虫流行广泛,给养殖业带来巨大的经济损失。解决等孢球虫病问题,首先应从诊断开始,常规诊断方法存在检测率低等诸多问题。因此,本研究通过传统猪球虫检测方法的改良和猪等孢球虫18SrRNA基因序列的特异PCR方法的建立,探索检测率高,操作简便的检测方法。猪球虫检测方法常用的是饱和盐水漂浮法。但饱和盐水漂浮法用到乳猪的球虫检测时,存在很多问题。产生问题的原因是,乳猪阶段营养来源完全靠母乳,此阶段由于猪的消化系统发育不完全再加上体抗力弱,消化道很容易损伤,消化道损伤导致肠道不能完全吸收脂肪、蛋白质等营养物质,从而粪便成分常常含有未吸收完全的蛋白质、脂肪等物质。当使用饱和盐水漂浮法检测猪球虫时,由于蛋白质盐析和脂肪一同漂浮于液表,影响镜检时的观察视野。因此,本研究利用猪球虫在高比重溶液可被漂浮的原理,选用尿素作为溶质的漂浮法取代现临床上惯用的饱和食盐水漂浮法,饱和尿素溶液的比重与饱和食盐水相当,且能使蛋白质变性,同时使用皂粒(主成分为高级脂肪酸纳)除去脂肪,再用硅酸盐除泡剂解决检测过程的气泡问题。在临床模拟实验中,发现改良漂浮法观察到的卵囊数远远多于饱和食盐水漂浮法(近20倍);通过对三个猪场进行检测临床检测发现,阳性率分别由5%,5%和10%提高至35%,25%和33%。结果表明,该方法有效除去了仔猪粪便中大多数脂肪以及蛋白质,从而有效消除了脂肪与蛋白质对镜检视野的影响,使镜检视野更为清晰,提高了检测率。本研究建立了特异性PCR方法检测猪等孢球虫。以猪等孢球虫18SrRNA基因序列设计特异引物,通过温度优化试验筛选出最佳温度为55.3°C;用猪艾美耳球虫,鸡柔嫩艾美耳球虫、犬等孢球虫、弓形虫、链球菌、大肠杆菌、魏氏梭菌、贝氏隐孢子虫等样本DNA作为对照进行特异性试验,猪等孢球虫可由特异性引物扩出条带,而对照样本的DNA和阴性对照不能被扩增;猪等孢球虫特异性引物CTS-5F/CTS-5R其敏感性最低可检测到3个卵囊。研究结果表明该方法敏感度高,可快速、特异地检测猪等孢球虫感染。应用饱和盐水漂浮法、改良粪便检测方法(皂粒粉+尿素+除泡剂)与特异PCR检测方法对临床样品进行检测比较,改良的粪检方法可弥补解决传统粪检方法的不足,在用漂浮法检测猪球虫方面,检测率明显有了很大的提高。但用改良的粪检方法与特异PCR检测方法实验对比时发现,由于建立的特异PCR检测方法有较好的特异性和敏感性,检测率高于改良粪检漂浮法,因此从检测率的角度特异PCR检测方法明显优于粪检漂浮法。等孢球虫检测方法的改良和检测效率的提高有利于掌握该病的感染情况和流行动态,为正确使用药物、及时治疗提供有效依据,对有效控制猪球虫病具有重要的指导意义。