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胰腺导管腺癌（Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC）是一种恶性程度极高的消化道肿瘤,患者5年生存率不足9%,严重影响人类健康。胰腺导管腺癌的一个显著特征是含有大量非肿瘤间质成分,占整个肿瘤组织的90%,其中绝大部分为肿瘤相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts,CAFs）,提示肿瘤相关成纤维细胞在胰腺癌进展过程中发挥重要作用。本研究中,我们对胰腺癌组织及其配对的癌旁组织进行定量蛋白质组学分析,筛选并鉴定了参与调控胰腺癌进展的新的差异表达蛋白。发现多个细胞外基质相关蛋白在胰腺癌组织中显著高表达,其中凝血酶敏感蛋白2（Thrombospondin 2,THBS2）表达上调最为显著,且与患者不良预后显著相关。先前研究报道,THBS2在多种肿瘤中表达失调,并扮演着促癌或抑癌双重角色。在胰腺癌患者血清样本中,高水平的THBS2可能作为胰腺癌早期诊断的有效标志物,但目前关于THBS2参与调控胰腺癌进展的生物功能及分子机制尚不十分清楚。我们通过免疫组织化学染色,系统分析了胰腺癌组织中THBS2的表达水平,发现与癌旁组织相比,THBS2蛋白在胰腺癌组织中的表达水平显著升高（p＜0.0001）,并且THBS2主要定位于肿瘤间质中,THBS2高表达与胰腺癌患者不良预后显著相关（p＜0.001）。进一步,在不同月龄的K-ras（KC）和p53（KPC）基因突变的小鼠自发胰腺癌模型的胰腺早期病变、胰腺癌组织以及人胰腺癌组织中,通过RNAscope原位杂交分析,提示THBS2主要定位于肿瘤间质的肿瘤相关成纤维细胞中,而且THBS2在早期病变,即胰腺上皮内瘤变（Pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN）期就开始表达,随着疾病进展,其表达水平逐渐升高。通过Western blot和ELISA分析对比不同胰腺癌细胞系及肿瘤相关成纤维细胞中THBS2的表达水平,进一步发现THBS2主要在肿瘤相关成纤维细胞中高表达,而在肿瘤细胞中表达水平很低。机制研究发现,胰腺癌细胞条件培养基或人转化生长因子β1（Transforming growth factor beta 1,TGF-β1）重组蛋白 rhTGF-β1 可以激活胰腺星状细胞内p-Smad2/3通路,并促使其活化为CAFs,同时提高THBS2的表达水平。同时,这种作用可以被TGF-β1受体靶向抑制剂显著逆转,表明肿瘤细胞来源的TGF-β1通过激活胰腺星状细胞内p-Smad2/3通路,促使其活化为CAFs,并提高THBS2的表达。接下来,我们继续探究了 CAFs来源的THBS2对肿瘤细胞恶性进展的影响。与对照组相比,过表达THBS2的CAFs条件培养基和人THBS2重组蛋白rhTHBS2均可显著促进体外培养的胰腺癌细胞增殖、克隆形成和粘附。与对照组相比,将过表达THBS2的CAFs与胰腺癌细胞共注射建立的裸鼠皮下移植瘤中,过表达THBS2的CAFs可显著促进胰腺癌细胞在小鼠体内的增殖。通过转录组测序结合蛋白组磷酸化芯片分析发现,CAFs来源的THBS2可能参与调控胰腺癌细胞内多条信号通路的活化。通过Western blot联合免疫荧光实验证明THBS2通过与肿瘤细胞表面integrinαvβ3/CD36互作,进而激活肿瘤细胞内MAPK信号通路。使用integrinαvβ3/CD36-MAPK通路靶向抑制剂阻断MAPK通路的活化后可逆转THBS2诱导的胰腺癌细胞体外增殖、克隆形成和粘附的作用。提示CAFs来源的THBS2通过与肿瘤细胞表面integrin αvβ3/CD36受体互作,激活肿瘤细胞内MAPK通路,进而促进胰腺癌细胞恶性进展。综上,本研究我们探究在胰腺癌肿瘤微环境中TGF-β1与THBS2介导肿瘤细胞与CAFs间通讯,进而促进胰腺癌进展。我们首次证明胰腺癌样本中高水THBS2的表达来源及其表达调控机制。我们发现胰腺癌组织中高水平的THBS2是由肿瘤微环境中的CAFs表达分泌,肿瘤细胞分泌的TGF-β1通过激活胰腺星状细胞内p-Smad2/3通路,促进其活化为CAFs,进而提高THBS2的表达。CAFs来源的THBS2作为一个促癌分子,通过与胰腺癌细胞表面integrin αvβ3/CD36受体互作,激活肿瘤细胞内MAPK通路,进而促进胰腺癌细胞恶性进展。