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第一部分小鼠糖尿病全层皮肤缺损模型的建立目的：本实验在链脲佐菌素(STZ)诱导ICR小鼠糖尿病模型的基础上复制全层皮肤缺损模型,观察创面愈合时间的变化及VEGF的表达水平,旨在探索构建小鼠糖尿病创面修复模型的新方法,为后续研究提供可靠的动物模型。方法：36只四周龄ICR雄性小鼠随机分为两组,其中普通对照组(ND组)12只,高脂饲料+STZ组(HS组)24只。两组小鼠均于4-15周龄各周测量体重,于第4、8、9及第10-15周龄时每周测量空腹血糖值。喂养4周后,HS组小鼠腹腔注射STZ80mg/Kg诱导糖尿病,将空腹微量血糖值≥11.lmmol/L的小鼠纳入糖尿病组(DM组)。糖尿病建模成功4周后(13周龄)两组小鼠进行全层皮肤缺损模型的复制。术后分别进行创面换药、照相、取材。NIH ImageJ图像分析软件进行创面愈合率的测定,Real time-PCR检测创面组织mVEGF-A的表达。结果：经STZ腹腔注射后,DM组小鼠血糖显著升高,达18.76±1.75mmol/L,与ND组的7.30±0.62mmol/L相比有统计学差异(P<0.05),同时观察到建模后小鼠尿量增加、体重下降,糖尿病成模率为100%：且高血糖水平至少可维持6周。糖尿病小鼠建模4周复制全层皮肤缺损创面后,其创面愈合较ND组延迟,术后第7、10、14天均有统计学差异(P<0.05),而术后第7天,DM组创面组织mVEGF-A mRNA表达水平也低于ND组(P<0.05)。结论：高脂饮食+STZ诱导小鼠成糖尿病模型方法切实可行,建模成功率达100%,且高血糖状态持续稳定,最少可保持6周。构建的糖尿病小鼠全层皮肤缺损模型创面愈合率较正常小鼠明显延迟、mVEGF-A的表达亦减低,可应用创面愈合的相关的动物研究。第二部分pcDNA3/hVEGF165裸质粒对糖尿病小鼠皮肤全层缺损创面愈合的促进作用目的：前期实验构建的糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面模型具有糖尿病创面愈合延迟的特征。因此在本部分实验中,我们将采用该模型观察重组质粒pcDNA3/hVEGF165促进创面愈合的作用进行研究。方法：36只四周龄ICR雄性小鼠随机分为2组,分别给予普通鼠粮(C组,n=12)或15%猪油强化的高脂鼠粮饲养(DM组,n=24)。经高脂鼠粮喂养4周后(即8周龄),高脂鼠粮饲养的24只小鼠腹腔注射STZ80mg/Kg诱导糖尿病模型。以空腹血糖≥11lmmol/L作为糖尿病小鼠的入组标准,随机分为pcDNA3空质粒十全层皮肤缺损组(P组)、pcDNA3/hVEGF165+全层皮肤缺损组(V组)。糖尿病建模成功4周后(13周龄)两组小鼠进行全层皮肤缺损模型的复制。C、P、V组背部全层皮肤缺损创面建模后即刻分别于创缘皮内注射200u1PBS溶液、60ug/100ul的pcDNA3空质粒、60ug/100ul的pcDNA3/hVEGF165质粒。术后当天、第3、7、10、14天分别进行创面定焦照相,第3、7、10、14天创面换药,术后第7、14天创面取材。NIH ImageJ图像分析软件进行创面愈合率的测定,Realtime-PCR检测创面组织hVEGF-A、 mCOL-Ia、 mVCAM的表达,并进行组织病理检查。结果：与C组相比,P、V两组血糖值明显升高(P<0.01)。P、V两组血糖值差异不明显,且高血糖状态至少维持至实验结束(即术后14天)。C组与P组比较,P组创面愈合率第7天时降低(P<0.05),第10、14天时创面愈合率明显降低(P<0.01,表3)。C组与V组比较,各时相点创面愈合率无明显统计学差异(P>0.05)。V组与P组比较,V组创面愈合较快,在术后第10天具有统计学差异(P<0.05)。V组小鼠hVEGF-A相对表达量较P、C组明显增高,在术后第7天、第14天均具有明显的统计学差异(P<0.05)。V、P组小鼠创面组织mCOL-Ia、 mVCAM mRNA的表达均低于C组,但无统计学差异(P>0.05)。在术后第7天,V组小鼠创面组织mCOL-Ia、 mVCAM mRNA的表达均高于P组,但未发现统计学差异(P>0.05)。结论：pcDNA3/hVEGF165裸质粒注射可使hVEGF165成功转染,并可促进糖尿病小鼠创面的愈合。其作用机制与直接增加小鼠创面组织hVEGFl65的表达有关。同时,转染hVEGF165后,创面组织中mVEGF-A mRNA的表达同步上升。