论文部分内容阅读
背景与目的:在中国,胃癌每年的新增病例在众多癌症中排第二。伴随着环境、饮食、生活压力的改变,胃癌的患病人群似乎有着年轻化趋势。长链非编码RNA是近十几年来各国医学科研学者的研究热门,被证明其广泛参与肿瘤的增殖、转移、侵袭、能量调节及自我更新等过程。Lnc SOX4作为一种已在多篇文章中被报道的长链非编码RNA,已被证实在肝癌、肺癌、卵巢癌等人类恶性肿瘤中表达量显著增高,是潜在的癌基因,但是有关Lnc Sox4在胃癌组织细胞中的有关作用目前尚没有研究涉及。本课题的目标就是通过检测Lnc Sox4在胃癌患者的组织及血清中的表达量,并且将其表达量与胃癌患者的临床数据相匹配,进行相关性对比分析。同时通过研究Lnc Sox4基因在胃癌的发生与进展中潜在的作用机制,为胃癌的早期诊断与靶向治疗提供新的位点和思路。材料和方法:1、本实验通过实时荧光定量PCR(rt-pcr)检测目标基因Lnc Sox4在胃癌患者的肿瘤组织、血清中的表达水平,并且整理患者的临床及病理数据(如年龄、性别、分化高低、浸润层次、肿瘤直径、淋巴结转移程度和TNM分期等),进行统计并分析互相之间的关联性,讨论并评价其作为一种新型生物学标志物的可能性。2、采用质粒介导的小干扰RNA(si RNA)转染技术干扰人胃癌细胞SGC-7901和HGC-27中Lnc Sox4的基因表达,之后采用实时荧光定量RT-PCR检测干扰后的表达效率,采用细胞生长曲线与平板克隆实验等方法检测Lnc Sox4对胃癌细胞的生长和增殖方面的影响,流式细胞技术检测经过Lnc Sox4处理后的这两种胃癌细胞的凋亡情况变化。3、通过Transwell细胞迁移实验检测对比经过Lnc Sox4干扰敲减前后的胃癌细胞转移能力的变化;并采用实时荧光定量PCR(rt-pcr)和Western blot技术检测干扰后的细胞上皮-间充质转化(EMT)相关基因表达的改变,分析其相关基因,讨论其引起胃癌细胞转移可能的机制。结果:1、实时荧光定量PCR(q RT-PCT)的检测结果显示,Lnc Sox4在胃癌患者的肿瘤组织以及患者的血清中相对于正常对照组为高表达。将该结果与对应患者临床及病理资料进行相关性分析后显示,Lnc Sox4在胃癌患者中的高表达与相应胃癌患者的淋巴结转移程度及临床分期呈显著相关(P(27)0.05)。2、采用si RNA对胃癌细胞系SGC-7901和HGC-27进行干扰敲减后,Lnc Sox4在胃癌细胞中的表达水平呈现明显降低,细胞生长的速度减缓,增殖数量和能力下降,而细胞凋亡却明显增加。可见在体外细胞系中,经干扰后的胃癌细胞的生长增殖能力显著降低。3、运用Transwell细胞迁移实验后表明,Lnc Sox4经敲减后,胃癌细胞的转移特性相较于对照组有明显减弱。Western blot的结果表明,敲减胃癌细胞中的Lnc Sox4后,EMT相关标志物表达下调,这也提示我们胃癌细胞经过敲减后,上皮-间充质转化也受到了抑制。结论:Lnc Sox4在胃癌患者的肿瘤组织、患者血清中表达量显著升高,且表达水平与对应胃癌患者的淋巴结转移程度及胃癌临床分期密切相关(P(27)0.05);Lnc Sox4能够显著抑制细胞生长速度,促使细胞的凋亡,并且可以促进胃癌细胞的上皮-间充质转化(EMT),从而在胃癌的发生及转移中起到一定的促进作用。综上,本研究揭示了Lnc Sox4对胃癌早期诊断、预后判断以及治疗的一些潜力。