论文部分内容阅读
吉林省的梅花鹿饲养量历来都位居全国之首,而我国饲养的梅花鹿主要以收茸为主,对于梅花鹿能否得到高产鹿茸一直倍受关注。吉林双阳地区的梅花鹿是我国最早繁育出的梅花鹿茸用新品种,其特点是耐粗饲,产茸量高,深受广大养户的喜爱。所以在以上优点的基础上,决定再从分子水平上对双阳梅花鹿鹿茸的生长繁育情况进行研究,寻找出对其直接或间接作用的功能基因,并对梅花鹿的品种进行改良,以达到获得高产茸茸鹿的目的。本试验对胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)两个胰岛素样生长因子家族的多肽基因进行研究。①采用PCR-SSCP技术分析了胰岛素样生长因子Ⅰ基因(IGF-Ⅰ)启动子区及外显子2在吉林双阳梅花鹿群体中的遗传多样性,结果发现有5对引物存在多态性,对IGF-Ⅰ基因多态片段进行克隆、测序,确定多态位点的突变位置。进行数据分析,得到其基因型频率、等位基因频率并获得优势基因型。对该基因上的微卫星位点PM进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对多态位点进行克隆、测序及数据分析。②因Genbank中没有梅花鹿IGF-Ⅱ基因序列的全长,所以为了更好的开展梅花鹿产茸性状的研究,本试验采用RACE的方法对IGF-Ⅱ基因进行扩增,获得了该基因的全长并在Genbank中登录。③根据已克隆到的IGF-Ⅱ基因的3′UTR序列设计引物进行PCR-SSCP,SSCP分析结果仅有一对引物出现多态性,对3′UTR基因多态片段进行克隆、测序,确定多态位点的突变位置。进行数据分析,得到其基因型频率、等位基因频率以及优势基因型。试验结果表明①IGF-Ⅰ基因启动子区的数据分析结果显示,引物P1共检测到四种基因型AA、AB、BB、CC,其中BB为优势基因型;引物P2检测到三种基因型AA、AB和BB,其中AA为优势基因型;引物P3共检测到三种基因型AC、BB、BC,其中BB为优势基因型;引物P4检测到两种基因型AA和AB,其中AA为优势基因型:引物P8检测到两种基因型AA和AB,其中AA为优势基因型。对该基因上的微卫星位点PM进行数据分析得到等位基因数及频率A:112(0.903)、B:129(0.097)及基因型频率AA:50(0.806)、AB:12(0.194)。②IGF-Ⅱ基因的全长已登录到Genbank中,因为得到三条序列,将其全部提交到Genbank上,登录号分别为IGF2V1:GU480023;IGF2V2:GU480024;IGF2V3:GU480025。③梅花鹿IGF-Ⅱ基因的3′UTR的数据分析结果显示,引物3U-2检测到三种基因型AA、AB和BB,其中BB为优势基因型。