【摘 要】
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土壤盐分是制约作物产量的主要因素,土壤盐渍化严重影响着农业的产量,尤其是使灌溉农业作物减产,同时盐分过高还可造成盐碱地,限制土壤的利用。随着分子遗传学和植物转基因技
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土壤盐分是制约作物产量的主要因素,土壤盐渍化严重影响着农业的产量,尤其是使灌溉农业作物减产,同时盐分过高还可造成盐碱地,限制土壤的利用。随着分子遗传学和植物转基因技术的发展,利用生物技术提高作物的耐盐性,使作物在盐胁迫环境中能正常生长并提高作物的产量,正受到越来越多的关注并取得了一定的成果。作物可以通过多种途径达到对盐胁迫的耐受,如操纵生物合成途径,在作物体内表达耐盐相关基因,改变基因的胁迫反应特性等。目前,已经证实SOS(Salt Overly Sensitive)盐胁迫信号途径在植物耐盐方面起着关键的调控作用,同时也控制着离子的自身稳定(homeostasis)。信号通路中Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(NHX1)倍受人们关注,NHX1是液泡膜中的一种Na~+/H~+反向运输体,可促进钠离子在液泡中的区隔化效应,跨液泡膜的pH为其提供能量。避免细胞质中的高Na~+盐毒害,维持高的K~+/Na~+比,达到离子平衡和渗透平衡,钠离子和氯离子区隔化在液泡中,不仅可作为有效的渗透调节剂,还可减小细胞毒性,从而提高植物的耐盐能力,解决植物生长受抑制等问题。本研究通过RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)的方法,它是基于同源序列克隆候选基因家族成员的快捷途径,鉴定和克隆新疆野生耐盐碱植物盐角草、盐爪爪、盐穗木NHX1基因、花花柴、盐爪爪、盐桦钙调蛋白(CaM)基因,并进行序列分析。研究工作首先根据GenBank 上已发表的各种物种的NHX1 基因序列,分析其保守性并根据保守区设计了7 条引物(上游4 条,下游3 条),分别组合经RT-PCR 扩增出新疆野生耐盐碱植物盐角草、盐爪爪、盐穗木NHX1 基因的核心片段,克隆于pMD18-T 载体,经DNA 序列测定后,结果与GenBank 中NHX1 基因序列进行同源性比较,确定克隆出的核心片段为NHX1基因的核心
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