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研究表明,在帕金森病患者脑组织中发现有大量的神经元发生程序性死亡,即细胞凋亡,有关实验证明,神经细胞损伤后高表达的Ndfip1蛋白,可与Nedd4家族蛋白结合,通过泛素化清除错误折叠的蛋白,进而抑制神经细胞的凋亡。本实验采用了入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及过表达Ndfip1蛋白的SN-MC-1细胞作为研究对象,通过奥沙利铂诱导细胞凋亡,研究在Ndfip1蛋白过表达情况下对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响,探讨Ndfip1对神经细胞的保护作用。第一部分稳定转染Ndfip1的SH-SY5Y细胞的鉴定。首先通过对实验室冻存细胞的复苏,传代以获得稳定生长的SH-SY5Y和SN-MC-1细胞,同时通过Western Blot法对SN-MC-1细胞蛋白表达进行鉴定,确认获得稳定可控的Ndfip1蛋白表达,供本次实验所用,并通过细胞冻存,使得细胞株得以延续。第二部分Ndfip1对奥沙利铂诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用。首先,选取典型抗肿瘤药物奥沙利铂,作用于SH-SY5 Y细胞,通过MTT比色法,鉴别经不同药物浓度及不同作用时间作用后对细胞生存率的影响情况,并对数据进行分析,得出半数有效抑制浓度；然后通过加入4-HT诱导SN-MC-1细胞大量表达Ndfi P1蛋白,经MTT比色法可观察到Ndfip1蛋白高表达后的SH-SY5Y细胞较野生型细胞增殖抑制率有所下降,推断Ndfip1蛋白能够对抗奥沙利铂对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用。最后利用流式细胞仪技术检测单独应用奥沙利铂诱导的细胞凋亡水平,以及过表达的Ndfip1蛋白对奥沙利铂诱导细胞凋亡的影响,同时对两组数据进行分析,结果提示Ndfip1蛋白对奥沙利铂诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,同时检测到凋亡蛋白Caspase-3表达的减少,进一步表明Ndfip1蛋白可能通过抗凋亡作用实现其神经保护作用。综上,本实验佐证了Ndfip1蛋白对神经细胞的保护作用,表明其可能对帕金森病的治疗具有潜在的正性作用,进一步研究其抗凋亡机制及相关作用靶点和信号通路,会对疾病的治疗产生积极的影响。