甜高粱茎秆汁液酒精发酵高产菌株的选育及发酵条件研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:marrymattion
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本文从出发菌株的特性开始,对影响南阳酵母原生质体形成和再生的条件,如预处理、菌体前培养时间、酶浓度及酶作用时间、酶解温度等进行了研究,获得了原生质体形成和再生的最佳条件:用1,4-二硫苏糖醇和EDTA的混合液对菌体进行20min的预处理,以2%的蜗牛酶进行酶解破壁,30℃酶解2h,原生质体形成率达99.2%,再生率达8.6%。制作紫外线对原生质体的致死率曲线,确定照射15s、20s、25s、30s、35s后的再生菌落进行初筛,经过TTC平板初筛后得到照射时间为25s和30s且效果较好的菌株10株,进行发酵性能测定,其中高产菌株占60%,从中筛选出一株酒精产率为12.5%(V/V)的高产菌株。 通过对影响突变株NY-06酒精发酵的各种因素进行了研究,确定了适合NY-06酒精发酵的条件。试验结果为:甜高粱汁液的处理以110℃,高温高压灭菌10min为宜;接种量10%;装液量100mL;发酵温度30℃;最适发酵初始pH值5.0。无机元素硫和磷对发酵有显著的影响,金属离子如K+、Mg2+、Ca2+的添加对酒精发酵影响明显;通过正交试验设计,确定了甜高粱茎汁酒精发酵最适无机元素和金属离子的使用量:硫酸镁0.0075g/100mL、磷酸二氢钾0.20g/100mL、氯化钙0.30g/100mL,在该优化条件下经发酵测得酒精产量为13.4%。发酵培养基中的氮源以添加尿素、酵母膏和蛋白胨为宜,每100mL发酵液添加0.65g尿素,酒精产量可达到15.1%(V/V)。
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