背景急性肺损伤（Acute Lung Injury,ALI）是一种临床病症,由于败血症或创伤等因素引发肺部炎症,进而导致肺功能严重衰退,并逐渐发展为急性呼吸窘迫综合症（Acute Respiratory distress syndrome,ARDS）。因此抑制肺部炎症是缓解急性肺损伤最重要的手段之一。目前临床上有关急性肺炎的治疗方案主要是依赖于传统的药物疗法。但是药物疗法有着很大的缺陷,例如会产生副作用,引起并发症等。以间充质干细胞（MSC）为基础的细胞疗法凭借其低副作用、低免疫原性等优势特点,逐渐被多种炎症性疾病的临床治疗所认可并接受。MSC能够通过胞外囊泡（EV）等途径分泌多种免疫及抗炎因子,从而能够对疾病发挥良好的抗炎作用。因此本项目利用MSC及其EV对LPS诱导的急性肺炎小鼠模型进行肺部干预,来探讨其对急性肺损伤的调控作用及内在机制,从而能够为临床肺炎相关疾病的干细胞疗法提供重要的实验依据和理论指导。目的1.探究MSC及其胞外囊泡对急性肺损伤的治疗效果;2.研究MSC胞外囊泡对急性肺损伤作用的调控机制。方法1.提取间充质干细胞（MSC）及其胞外囊泡对肺炎模型进行治疗。分别提取经血源子宫内膜干细胞（Men SC）和脐带间充质干细胞（UC-MSC）及其胞外囊泡（EV）;运用流式细胞术和透射电子显微镜扫描以及免疫印迹法（Western Blot）进行细胞表型和外泌体鉴定;并利用气管滴注对LPS诱导的肺炎模型进行干预;并运用组织化学染色法观察小鼠模型肺部组织形态改变;运用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测MSC-EV对小鼠肺部炎症因子表达的影响。2.分析MSC-EV中对急性肺炎有潜在调控作用的mi RNA。将上述提取的MSC-EV进行mi RNA的芯片扫描,得到MSC-EV中mi RNA的表达谱,对前十位高表达的的mi RNA进行q RT-PCR分析,选取LPS诱导的肺炎模型中表达显著上调的mi RNA。3.分析验证胞外囊泡中的特定mi RNA对急性肺炎的调控作用。利用慢病毒在MSC中稳定干扰和过表达特定的mi RNA后,提取EV并用其来干扰小鼠肺炎模型;对肺组织进行HE染色和CD68免疫组化染色,观测肺组织炎症表型的变化;取肺组织里的RNA,运用q RT-PCR检测炎症因子的m RNA表达水平;进行肺泡灌洗液的提取,进一步观察稳定干扰和过表达特定mi RNA后的MSC-EV对急性肺炎的抑制作用是否丧失或增强。结果1.成功提取Men SC、UC-MSC及其EV并对其进行了鉴定;有效建立了LPS诱导的小鼠急性肺炎模型,并发现Men SC、UC-MSC及其EV对LPS诱导的小鼠肺炎模型都有明显的改善效果,显著抑制了中性粒细胞的内流,减弱了肺泡肿胀、肺泡壁的增厚以及炎症细胞的浸润,并抑制了肺泡的通透性以及炎症因子的表达。2.通过对提取的MSC-EV进行mi RNA的芯片扫描发现:mi R-574-5p在MSC-EV中高表达,并在LPS诱导的炎症模型中表达显著上调。3.利用mi R-574-5p缺失和过表达的MSC-EV对小鼠肺炎模型进行干预。结果发现:与较未缺失组相比,mi R-574-5p缺失后减弱了MSC-EV对肺部炎症的抑制作用。mi R-574-5p过表达则会进一步增强野生型的MSC-EV对小鼠肺部炎症的抑制作用。以上结果表明:MSC能够通过mi R-574-5p负性调控急性肺炎。结论1.Men SC、UC-MSC及其EV对急性肺炎有显著的改善作用;2.MSC-EVs富含有与炎症调节相关的mi R-574-5p;3.MSC-EVs通过分泌、介导mi R-574-5p负性调控急性肺炎。