论文部分内容阅读
目的 为了解人乳头瘤病毒(Human papillomavirus HPV)16型的E7基因对细胞周期的影响及该影响对细胞转化的作用,探讨HPV-16E7基因在宫颈癌进展中的作用。方法 收集宫颈癌标本,并经病理鉴定。从中筛选HPV16阳性标本,从标本中经PCR扩增回收HPV16E7基因片段,将鉴定正确的E7基因片段插入到穿梭质粒pAdTrack-CMV后,与骨架质粒pAdEasy-1在Bj5183中同源重组,重组质粒转染HEK-293细胞,包装表达HPV16E7基因的重组腺病毒,感染HPV-18阳性的Hela细胞,MTT法测细胞的增值率,流式细胞仪测感染前后细胞周期相的改变和细胞周期蛋白D表达的差异。结果 在荧光显微镜下可以看到转染成功的HEK-293细胞中有绿色荧光蛋白的表达,从中可以收获高感染效率的重组腺病毒,重组腺病毒感染的Hela细胞中也有绿色荧光蛋白的表达,提取HEK-293细胞RNA,反转录PCR可以检测到E7基因的表达,MTT试验结果显示感染前后Hela细胞增殖差异有显著意义(P<0.01),流式细胞仪检测感染后细胞周期时相改变,细胞周期蛋白D感染前后表达差异有显著意义(P<0.01)。结论 携带HPV16E7基因的腺病毒可感染细胞,并在细胞内表达,E7基因的表达影响细胞周期蛋白的表达,对恶性肿瘤细胞同样有促进增殖的作用,为宫颈癌治疗和抑制宫颈癌进展研究提供新的方向和理论基础。