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大豆(Glycine max(Linn)Merril)属豆科蝶形花亚科大豆属的古四倍体(2n=40)植物,是世界上植物油和植物蛋白最重要的来源之一。因此,科学家高度重视大豆的品种改良。蓝光反应存在于所有的高等植物中。在拟南芥中蓝光反应的光受体隐花色素的功能已比较清楚。但大豆隐花色素的功能还不清楚。为了研究大豆中的隐花色素基因的功能,将大豆中克隆到的隐花色素基因转入拟南芥的各种突变体中,通过基因功能互补作用来推测大豆中的基因功能;另一方面,将其转入大豆中,进一步研究和证实其基因的功能。取得了以下结果: 1 大豆隐花色素基因CRY1、CRY2在拟南芥中的功能 CRY1在拟南芥中的主要功能之一是抑制下胚轴的伸长,而CRY2则主要是控制植物的开花。利用农杆菌介导浸花法成功地将大豆隐花色素基因CRY1、CRY2的过表达载体转入拟南芥Co1-4、cry1和cry2单突变体中,并获得了转基因植株。通过表型观察发现,大豆中的CRY1、CRY2在拟南芥下胚轴伸长中具有功能互补作用,而且CRY1的效应明显强于CRY2。就开花时间而言,转CRY1的转化植株开花明显比野生型和突变体早,这与拟南芥隐花色素CRY1的功能类似。转CRY2的转化植株,虽然比野生型开花早,但却与突变体开花时间不明显。 2 对大豆子叶节的丛生芽诱导、芽的伸长及根的再生等进行了研究,建立了一套高效、稳定的再生体系,筛选出合丰35、垦农18等再生频率较高的大豆品种。 3 优化了农杆菌介导转化大豆子叶节的转化体系,确定了除草剂作为筛选剂的浓度为3-4 mg L-1,浸染农杆菌菌液浓度OD600为0.7左右,浸染时间30 min,共培养时间3d,乙酰丁香酮浓度为100μmoll-1为好的转化体系。 4 探索了农杆菌介导辅助抽真空的大豆茎尖转化途径,采用大豆幼苗的裸露茎端分生组织为受体进行遗传转化,通过喷洒或涂抹除草剂进行筛选,从而提高转化频率,缩短实验周期。