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本研究从茶园中采取±样,以咖啡因作为唯一碳源和氮源,分离、筛选出降解咖啡因的菌株,对其初步鉴定,并对菌株降解条件进行了优化。通过HPLC法,初步对咖啡因降解机理进行研究,并利用正交实验对其降解茶渣中咖啡因的条件进行了优化,检测了咖啡因的降解效果。分离纯化黄嘌呤氧化酶,对其酶学性质进行了初步的研究。本文从茶园土壤中筛选出降解咖啡因的目的菌株,对其进行初步鉴定,并对菌株降解条件进行了优化。当pH为4.5,温度为30℃,培养3d,通风量较大时菌体生长较好;在最佳降解条件下1 g湿菌体1 h降解咖啡因0.06 g。为微生物脱除咖啡因提供了参考。通过HPLC法,初步对咖啡因降解机理进行研究,细菌中咖啡因降解的主要代谢途径是去甲基化途径。咖啡因降解的后续产物是从1,3,7-三甲基黄嘌呤结构上连续的去除甲基基团,形成3,7-二甲基黄嘌呤为第一个主要代谢产物和随后的7-甲基黄嘌呤和黄嘿呤。利用正交实验对菌株降解茶渣中的咖啡因条件进行优化,结果表明,时间对茶渣中咖啡因的降解率影响最显著。最优组合为发酵7天,35℃,pH 5.5,含水量为88.0%,测定茶渣中咖啡因的降解率为68.5%。此法为解决茶渣中含有过多的咖啡因问题提供了参考,具有十分重要的经济效益和社会效益。依次使用DEAE-Cellulose 52离子交换柱、PAGE切胶回收可分离纯化出黄嘌呤氧化酶,该酶由亚基组成,分子量分别为7.1和4.0 kDa,具体亚基数量没有确定;其最终回收率为20.0%,纯化倍数为43.1,酶比活为10.48 U/mg;该酶的最适作用温度为40℃,在20-40℃之间酶活比较稳定;最适pH值是7.8,在pH 3-9时较稳定;Zn2+、Fe2+、Fe3+和Ca2+、Mn2+对黄嘌呤氧化酶活性有促进作用,K+、A13+、Mg2+和Cr2+对黄嘌呤氧化酶活性有抑制作用。