犬瘟热病毒感染抑制细胞自噬致细胞凋亡的研究

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犬瘟热是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染引起的急性、高度接触性传染病。CDV入侵机体后,迅速感染靶细胞——T、B淋巴细胞等免疫细胞,并引起淋巴细胞急剧减少,进而导致严重的免疫抑制。细胞自噬是溶酶体实现细胞质成分清除和再循环的机制,是维持细胞稳态、形态发生、衰老、细胞分化和细胞免疫的循环机制。自噬在包括癌症,神经退行性疾病和传染病在内的各种疾病的发病机理中也起着重要作用。近年来,对自噬的调节已成为各类疾病引起细胞损伤及坏死过程中的研究焦点。本实验以Vero-E6细胞为对象,对犬瘟热病毒在细胞中的复制而引起细胞损伤的机制进行研究,旨在探索CDV在细胞复制过程中对细胞的自噬、凋亡之间的作用关系,以及观察使用自噬抑制剂、自噬诱导剂、凋亡抑制剂对细胞自噬与凋亡进行调控后,对CDV复制的影响。结果表明,CDV在Vero-E6细胞中的复制会对细胞造成损伤,出现细胞变圆、脱落悬浮、形成合胞体等细胞病变,并与病毒感染复数、感染时间成正相关,通过荧光显微镜也可观察到CDV的NP蛋白红色荧光随着感染时间的延长有明显增多的趋势。Western-blot检测表明,在感染早期,CDV能抑制细胞自噬利于病毒复制。为进一步研究细胞自噬与CDV复制的关系,通过添加Rapamycin(自噬诱导剂)、MRT68921(自噬抑制剂)、Z-VAD-FMK(凋亡抑制剂)进行进一步探讨,结果发现,自噬抑制剂有助于CDV在细胞中的复制,凋亡抑制剂则反之,抑制细胞自噬能促进CDV的繁殖。为证实CDV感染引起的细胞病变是否与细胞凋亡有关,检测了 CDV感染细胞后的多种细胞凋亡指标。结果表明细胞线粒体膜电位、细胞与线粒体的活性氧均有所升高,Caspase-3被显著激活,Bax表达上调、线粒体分裂和内容物的释放等现象,说明CDV感染细胞后可通过线粒体损伤导致细胞凋亡。
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