论文部分内容阅读
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染和官颈癌的相关性已经确定,但是HPV感染与结直肠癌的关系以及HPV病毒是否可以通过血液传播至今还没有一个定论。为了调查HPV在结直肠癌病人中的存在情况,并同时研究HPV DNA是否可以通过血液传播以及在结直肠癌病人外周血中检出HPV DNA是否可以作为一个诊断结直肠癌的分子标记,本实验收集了96对配对的结直肠癌病人的癌组织、癌旁粘膜和外周血,同时收集了48例健康体检者的外周血,用通用引物PGMY/GP PCR的方法检测其中HPV DNA的存在情况,并用焦磷酸测序和反向斑点杂交的方法进行HPV分型分析。结果在32例(33.3%)病人样品(结直肠癌组织或癌旁粘膜或外周血)中检测到HPV DNA的存在。其中癌组织中检测到28例(29.2%),癌旁粘膜中检测到3例(3.1%),外周血中检测到4例(4.2%)。在48例健康志愿者的血液样品中共检测到3例(6.3%)HPV阳性样品。分型结果显示HPV16型为主要感染型别,35例HPV阳性病人样品中33例为HPV16(91.4%),其余三例分别为HPV18、HPV51、HPV59。3例HPV阳性志愿者血液中均为HPV16。癌组织和癌旁中的检出率有显著差异(P<0.001),显示HPV可能对结直肠癌的发生发展有一定作用。病人外周血和健康志愿者的外周血HPV DNA检出率并没有显著差异,所以我们认为外周血中HPV DNA的存在并不能作为预测癌症风险的一个分子标记,但是HPV DNA在血液中的检出提示血液可能是HPV传播的途径之一。为进一步研究HPV16 E6癌基因在结直肠癌发生、发展中所起的作用,本实验构建了pEGFP-HPV16 E6真核表达载体,为后期机制研究打下基础。同时我们还研发了一种利用MGB Taqman探针荧光定量PCR同时检测HPV16、18的方法。