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猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒属,冠状病毒科,能够导致仔猪严重腹泻,给养猪业带来重大的经济损失。S蛋白作为PEDV最主要的膜蛋白,已有报道证实S蛋白含有病毒感染细胞的抗原表位区,但关于S蛋白介导PEDV进入细胞还有待于进一步研究,故本主要通过构建PEDV S1的伪型病毒研究富含抗原表位区的S1蛋白在PEDV进入细胞中的作用。本研究中,首先,为有效的检测PEDV,利用Vero E6繁殖的PEDV做为抗原,制备PEDV全病毒多克隆抗体。利用ELISA和间接免疫荧光对抗体的效价和特异性进行检测,结果显示该多克隆抗体与PEDV有很好的特异性反应。其次,为研究PEDV的感染特性,摒弃非同源细胞系,对PEDV在猪小肠上皮细胞(IEC)上进行适应培养,通过在IEC细胞中盲传10代,对第10代病毒液进行检测。反转录PCR、间接免疫荧光和电镜检查均证PEDV能够感染IEC细胞系,并稳定传代,故最终确定1EC是PEDV的易感细胞系。再次,为研究PEDV S1蛋白功能,构建S1蛋白的真核表达质粒,建立稳定表达S1蛋白的BHK-21细胞系,命名为BHK-S1。反转录PCR和间接免疫荧光鉴定,成功构建了BHK-S1稳定细胞系。利用BHK-S1稳定细胞系和重组的VSV系统,成功制备PEDV的伪型病毒VSV△G*S1。反转录PCR和激光共聚焦检测结果显示,重组病毒构建成功。最后,为研究S1蛋白在VSV△G*S1感染IEC细胞中的作用,对感染VSV△G*S1的IEC细胞中的s1蛋白进行动态定位。激光共聚焦结果显示,S1蛋白在病毒感染IEC细胞系的吸附和进入过程中发挥关键作用。本研究为进一步检测PEDV提供了有效实用的实验材料,为研究PEDV的感染特性和探索S1蛋白在PEDV感染细胞时的作用提供了参考。