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第一部分Cx43基因敲除小鼠胶原性关节炎模型的建立目的:以牛Ⅱ型胶原(Bovine Collagen typeⅡ, BCⅡ)皮内免疫Cx43(connexin43, Cx43)基因敲除杂合型(Cx43+/-)和野生型(Cx43+/+)小鼠,建立Cx43基因敲除小鼠胶原性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型。方法:用BCⅡ和完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant, CFA)皮内注射免疫Cx43+/-和Cx43+/+雄性小鼠,观察关节部位的肿胀并进行关节炎指数评分;采用X线摄片、病理组织学等方法进行小鼠病理学特征分析;用ELISA法检测小鼠血清抗BCⅡ胶原抗体水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠踝关节与脚趾有明显的肿胀,关节炎指数升高;X线摄片结果和病理组织学分析结果显示,Cx43+/+和Cx43+/- CIA小鼠的关节均呈现典型的关节炎病变的特征;ELISA结果显示:模型组小鼠血清中抗BCⅡ胶原抗体水平较对照组明显高(P<0.05)。结论:本实验成功建立了BCⅡ诱导的Cx43+/+小鼠和Cx43+/-小鼠CIA模型。BCⅡ诱导的Cx43基因敲除小鼠CIA模型的病理学特征与人类RA极为相似,为更好地进行人类RA以及Cx43相关研究提供了一个良好的动物模型。9周龄、Cx43+/+小鼠更易诱导出CIA模型。第二部分针刺治疗对胶原性关节炎Cx43基因敲除小鼠的Th1/Th2细胞亚群的影响目的:观察针刺对Cx43+/+和Cx43+/- CIA小鼠的疗效和脾淋巴细胞中Th细胞亚群分布,探讨Cx43与针刺疗效的相关性及其机制。方法:在初次免疫后第4w开始对CIA小鼠连续针刺治疗3w,观察其关节炎指数,应用三色流式细胞术对CIA组小鼠和对照组小鼠脾淋巴细胞中辅助T细胞(T cell helper, T h)亚群分布进行检测。结果:针刺治疗后,Cx43+/+ CIA小鼠的关节炎指数下降较Cx43+/- CIA小鼠明显(P<0.05)。针刺抑制Cx43+/+ CIA小鼠Th1细胞分泌,降低Th1/Th2比值,对Th2细胞的分泌无明显影响;而针刺对Cx43+/- CIA小鼠Th1和Th2均无明显影响。结论:针刺治疗Cx43+/+ CIA小鼠疗效明显优于Cx43+/- CIA小鼠,提示针刺疗效与Cx43基因相关,其疗效可能是通过调节Th1/Th2使之接近动态平衡而起作用的,针刺疗效与这种调节作用成正相关。第三部分针刺对胶原性关节炎Cx43基因敲除小鼠血清IL-1β和TNF-α的影响目的:观察针刺对Cx43+/+和Cx43+/- CIA小鼠的疗效和外周血血清中IL-1β和TNF-α的水平的影响,探讨Cx43与针刺疗效的相关性及其机制。方法:在初次免疫后第4w开始连续针刺治疗3w,观察关节炎指数,并以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各小鼠外周血血清中IL-1β和TNF-α的水平。结果:针刺治疗后,Cx43+/+ CIA小鼠的关节炎指数下降较Cx43+/- CIA小鼠明显(P<0.05)。针刺显著降低了Cx43+/+ CIA小鼠外周血血清IL-1β和TNF-α的含量(P<0.05),而对Cx43+/- CIA小鼠无明显影响。结论:针刺对Cx43+/+ CIA小鼠疗效明显优于Cx43+/- CIA小鼠,提示针刺疗效与Cx43基因相关,其疗效可能是通过调节外周血血清IL-1β和TNF-α的水平而起作用的,针刺疗效与这种调节作用成正相关。