目的研究核干细胞因子（Nucleostemin,NS）促进核仁内周期蛋白依赖激酶抑制因子1b(p27^kip1,p27)泛素化降解对肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生发展的影响及机制;探讨NS和p27在HCC病人中的表达及临床意义。方法筛选HCC组织中与p27相互作用的分子NS。验证NS与p27的相互作用,明确两者相互作用的结构域。探讨NS-p27相互作用对p27与CDK2之间的功能调节机制,并在体内、外水平研究NS-p27相互作用对肝癌细胞增殖和肝癌生长的影响。检测8对新鲜HCC及癌旁组织和118例HCC石蜡芯片中NS和p27的表达,分析其与患者生存和预后的相关性。结果1.IP-MS结果表明NS是HCC组织中与p27相互作用的分子。免疫共沉淀,GST pull-down及免疫荧光证实两者存在直接相互作用,且两者在肝癌细胞的核仁中存在明显共定位。2.体外泛素化实验及核仁核质分离实验表明NS主要介导肝癌细胞核仁内p27的泛素化降解。免疫沉淀及免疫印迹实验表明NS介导p27泛素化降解可破坏p27-CDK2间的相互作用,导致CDK2和cyclin E蛋白表达水平的上调。3.EdU细胞增殖实验、CCK-8实验、流式细胞术表明干预NS表达可抑制肝癌细胞增殖。裸鼠成瘤实验表明干预NS表达可抑制裸鼠体内肝癌的生长。4.免疫印迹和免疫组化结果表明,NS在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织,且与p27的表达呈负相关（r=-0.494,p<0.01）。临床参数统计表明NS的表达与HCC组织分化程度（p=0.001）、有无转移（p=0.039）及患者血清AFP浓度（p=0.020）存在相关性;p27的表达与组织分化程度（p=0.021）及患者血清AFP浓度（p=0.037）存在相关性。Kaplan–Meier分析结果表明NS高表达/p27低表达与患者生存率的降低显著相关（p<0.001）。结论1.在肝癌细胞中,NS募集p27从核质入核仁进行泛素化降解,解离核质中p27-CDK2的结合,活化CDK2,促进肝癌细胞增殖。2.NS高表达/p27低表达提示HCC诊断,可作为HCC患者预后不良的一项指标。3.NS/p27途径可作为HCC发生发展的分子调控点,有望成为靶向治疗的新靶点。