目的：动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是众多心脑血管疾病共同的病理基础，也是心血管系统疾病中最常见的疾病，严重危害人类健康。AS的发生发展是一个多因素参与的缓慢发展的病生病理过程，其中内皮细胞、血管平滑肌细胞、淋巴细胞和巨噬细胞与AS斑块的形成有着密切的联系。血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC）的表型转化和增殖在AS的发生、发展中发挥重要作用。VSMC的主要作用是通过舒张和收缩改变血管直径，使血管保持适当的血流压力，此时的VSMC表现为收缩型表型，其增殖及合成活性很低。在多种病理因素的作用下，VSMC的表型可由收缩型转化为合成型。研究表明，血管表型转化是高血压，AS和血管成形术后再狭窄的心血管疾病VSMC增殖和迁移的关键性始动因素，处于合成状态的VSMC能够合成和分泌大量细胞外基质，而细胞外基质又可影响血管的增殖，黏附和迁移过程。而在生理条件下，VSMC增殖和凋亡之间保持平衡，在许多病理状态下可使其增殖失控，从而引起血管壁的一系列变化。众多研究表明，VSMC增殖在AS病变的形成过程中以及在经皮冠状动脉介入术后血管再狭窄等心血管疾病的发病机制中起关键性的作用热休克蛋白60（heat shock protein60，HSP60）作为一类自身免疫原性蛋白，与AS的发生发展有密切关系。在人AS区域的血管内膜、巨噬细胞和平滑肌细胞均可检测到HSP60表达，且HSP60的表达强度与病变程度呈正相关。而且在心脏病患者和不同程度的冠状动脉疾病患者的血清中都有HSP60表达，患者病情越严重，HSP60表达水平越高。尽管VSMC增殖与AS的发生发展有密切的关系，但在AS中VSMC的行为是如何受到调节的目前尚不完全清楚。本研究将通过体外细胞实验确定HSP60与VSMC增殖的关系，探讨HSP60与VSMC细胞周期的关系，试图通过分析HSP60调控VSMC增殖的相关机制研究，为AS发病机制的研究提供新的视角及理论基础。方法：（1）A7r5细胞培养：A7r5细胞用含10%胎牛血清和100U/ml的青霉素/链霉素的DMEM培养基，在37℃、CO2孵箱中培养，取处于对数生长期、生长至80%~90%融合率的细胞用于实验；（2）MTT方法观察细胞增殖变化，检测不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激A7r5细胞24h后，观察对细胞增殖的调节作用，并确定最佳诱导细胞增殖的浓度；（3）利用10ng/ml HSP60刺激VSMC24h后收集细胞，流式细胞术检测细胞周期的变化；（4）不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激VSMC24h后，利用Western blot检测CDK4的表达量；（5）不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激VSMC24h后，利用Western blot检测cyclinD1的表达量；（6）不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激VSMC24h后，利用Western blot检测PCNA的表达量。结果：（1）MTT方法观察细胞增殖结果显示：不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激细胞后，在20ng/ml、50ng/ml和100ng/mlHSP60时细胞增殖变化不明显，当1ng/ml、10ng/ml HSP60刺激时，细胞增殖数量均明显增加（P<0.05），二者没有明显区别；（2）10ng/ml HSP60刺激细胞后，流式细胞术检测处于细胞周期中S期的细胞明显升高；（3）不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激VSMC后，Western blot检测CDK4的表达明显增加，随着刺激剂量的加大，CDK4的表达逐渐增加，其中在100ng/mlHSP60浓度时，CDK4的表达量增加最多；（4）不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激VSMC后，Western blot检测低浓度（<10ng/ml）HSP60对cyclin D1的表达基本没有影响，当HSP60浓度大于10ng/ml时，cyclin D1的表达随着HSP60浓度的增高而增加，具有明显的剂量依赖性，HSP60的浓度为50ng/ml时，cyclin D1的表达量最高，当HSP60的浓度大于50ng/ml，反而抑制cyclinD1的表达；（5）不同浓度HSP60（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）刺激VSMC后，Western blot检测PCNA的表达明显增加，其中在10ng/ml HSP60浓度时，PCNA的表达量增加最多，而在50ng/ml、100ng/ml HSP60浓度时，PCNA的表达没有明显变化.结论：（1）HSP60能够诱导血管平滑肌的增殖，且在HSP60小剂量时与浓度的变化呈正相关。其中在10ng/ml HSP60刺激下，细胞的增殖更明显；（2）HSP60对血管平滑肌细胞增殖的促进作用，与其对细胞周期的调节有关；（3）HSP60可能是通过对CDK4/cyclin D1通路及细胞周期素PCNA的调控实现对细胞周期的调节作用。