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目的:探究瞬时电位感受器通道-TRPV1、TRPV4钙离子通道与膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)机械性刺激痛觉敏感之间的联系,以及“易层”贴敷疗法治疗KOA疼痛的治疗机制,尝试寻找药物与TRP通道的联系,通过干预KOA机械刺激痛敏,减轻炎症反应并控制疼痛。方法:1.对比KOA患者和健康志愿者的WOMAC膝关节疼痛指数和单膝支撑实验结果;同时对比KOA患者的滑膜组织和健康人群的滑膜组织中TRPV1、TRPV4的蛋白及mRNA表达;2.建立大鼠的KOA模型,检测其疼痛行为学改变,滑膜组织TRPV1、TRPV4的蛋白及mRNA表达,以及选择性TRPV1、TRPV4抑制剂对机械痛阈的影响和改变。3.观察大鼠滑膜细胞在使用选择性TRPV1和TRPV4抑制剂和激动剂后的钙离子通道开放变化情况;4.建立大鼠的KOA模型,观察“易层”贴敷疗法对KOA大鼠的疼痛行为学影响,观察药物对机械性痛敏的改善能力,滑膜组织TRPV1和TRPV4蛋白及mRNA表达的影响。5.建立大鼠的KOA模型,通过HE染色和ELISA法观察“易层”贴敷对KOA病情进展中的炎症相关细胞因子的影响。结果:1.KOA患者的WOMAC指数和单膝支撑试验阳性率均显著高于正常人群,差异有统计学意义(P<0.05);KOA患者的滑膜组织对比正常人体滑膜组织,TRPV1、TRPV4的蛋白和mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);2.疼痛行为学检测结果显示,KOA大鼠的机械性刺激疼痛阈值和患肢受力显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。KOA大鼠的滑膜组织中,TRPV1、TRPV4的蛋白和mRNA表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05)。使用TRPV1、TRPV4选择性抑制剂,可以提高KOA大鼠的机械性刺激痛阈,差异有统计学意义(P<0.05);3.在大鼠滑膜细胞内,使用TRPV1和TRPV4选择性抑制剂,可以分别降低通道的开放能力,对应的钙离子内流也会减少。而使用TRPV1和TRPV4选择性激动剂,则可以提高通道的开放能力,对应的钙离子内流则明显上升。4.在KOA大鼠膝关节局部使用“易层”贴敷,能够有效提高KOA大鼠模型机械性痛阈,差异有统计学意义(P<0.05),同时对KOA大鼠滑膜组织中TRPV1、TRPV4的蛋白表达有抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),但对于二者的mRNA表达没有影响。5.在KOA大鼠膝关节局部使用“易层”贴敷,能够部分下调KOA大鼠病情进展中产生的部分促炎细胞因子含量水平,同时上调部分抑制炎症的细胞因子含量水平,差异均有统计学意义(p<0.05)。结论:1.在临床试验中,KOA患者的疼痛表现出了机械性刺激敏感的特点,TRP通道家族成员TRPV1、TRPV4与之具有高度相关性;2.TRPV1和TRPV4在基础实验中表现出对机械性痛敏的介导能力,抑制和激动该通路,在体内和体外实验中均可以检测出机械性痛敏的快速改变;3.中医外治法--“易层”贴敷能够对TRPV1和TRPV4介导的KOA机械性痛敏具有改善能力,缓解疼痛。同时对KOA病情进展中的多种细胞因子产生影响,扭转炎症环境。4.“易层”贴敷所代表的“温经活血”法,在中医药治疗KOA领域,有良好的疗效和广阔的研究前景。