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目的为了有效提高多西他赛抗肿瘤效应,降低毒副作用及逆转肿瘤多药耐药作用,本课题拟选用脂质体作为载体,构建TPGS修饰的多西他赛脂质体给药系统,考察该给药系统在体内外的抗肿瘤效应及逆转多药耐药作用,为开发新型的抗癌药物给药系统提供了参考依据。方法1采用高效液相色谱法建立测定多西他赛含量的方法;考察了测定多西他赛脂质体包封率的方法。2以多西他赛为模型药物,选取DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000、TPGS为载体材料,通过薄膜分散法制备DSPC-DTX-liposome、PEG-DTX-liposome及TPGS-DTX-liposome,考察包封率、载药量等主要指标,优化处方,制备多西他赛脂质体并进行特性评价。3以A549、A549/DDP、MCF-7及MCF-7/ADR为模型细胞,通过细胞毒性、细胞摄取、P-糖蛋白抑制实验及细胞凋亡实验,评价不同多西他赛制剂体外抗肿瘤多药耐药作用。4建立荷A549/DDP细胞肿瘤异种移植裸鼠模型,经尾静脉注射给药后,测定肿瘤体积、裸鼠体重变化及抑瘤率,评价不同多西他赛制剂体内抗肿瘤多药耐药作用。结果1建立高效液相色谱法测定多西他赛含量的方法,多西他赛在5~60μg/ml范围内具有良好的线性,精密度、重现性、方法回收率均符合含量测定方法。采用超高速离心法测定包封率,加样回收率在98~105%范围内,RSD值小于1.0%,符合包封率测定要求。2采用薄膜分散法制备多西他赛脂质体,优选药脂比为15:1,水化介质为pH7.4、10mmol/ml的PBS,制备DSPC-DTX-liposome,粒径126.2±4.0nm,Zeta电位-4.78±0.14mv,包封率90.8±5.1%,载药量6.0±0.1%;PEG-DTX-liposome粒径137.0±0.7nm,Zeta电位-0.165±0.01mv包封率96.2±0.2%,载药量5.9±0.3%;TPGS-DTX-liposome粒径140.9±6.0nm,Zeta电位-0.196±0.08mv,包封率99.0±0.9%,载药量8.4±0.01%。各脂质体在含0.1%吐温-80、pH7.4的PBS释放介质中,1h内无突释效应,72h内释放缓慢。4℃放置21天,粒径、包封率变化不大,表明各组脂质体稳定性良好。3细胞毒性实验结果显示,TPGS-DTX-liposome组的细胞毒性最大,其IC50值明显低于其他各组(p﹤0.01)。细胞摄取实验显示,Coumarin-6-TPGS-liposome的荧光强度明显强于其他组(p﹤0.05),则细胞对TPGS修饰的脂质体具有较强的摄取能力。与其他两组空白脂质体相比,TPGS-liposome组能显著提高A549/DDP、MCF-7/ADR对罗明123的摄取量(p﹤0.05),抑制P-gp的过表达,减少药物外排,促进药物在肿瘤细胞内富集。TPGS-DTX-liposome组在A549、A549/DDP、MCF-7、MCF-7/ADR中的总凋亡率分别达62.85%、44.21%、55.9%、32.6%,表明TPGS-DTX-liposome能促进耐药、敏感细胞株凋亡;与其他组相比,TPGS-DTX-liposome组的总凋亡率具有显著性差异(p﹤0.05)。4体内抗肿瘤实验结果显示,TPGS-DTX-liposome组肿瘤体积明显小于其他两组脂质体(p﹤0.05)。14天后,三组多西他赛脂质体裸鼠体重变化不大,而Taxotere~?组裸鼠体重显著降低(p﹤0.05),表明Taxotere~?对裸鼠产生了严重的毒副作用;与其他组相比,TPGS-DTX-liposome的抑瘤率具有显著性差异(p﹤0.05)。结论采用薄膜分散法制备的TPGS-DTX-liposome具有良好的稳定性、缓慢释放行为,粒径140.9±6.0nm,Zeta电位-0.196±0.08mv,包封率99.0±0.9%,载药量8.4±0.01%。四株细胞对Coumarin-6-TPGS-liposome均具有较强的摄取能力;TPGS-DTX-liposome对四株细胞均具有较高的毒性及凋亡率,进而促进细胞凋亡,诱导细胞死亡;P-gp抑制实验进一步验证了TPGS-liposome组能抑制耐药细胞膜上P-gp过度表达,减少药物外排,增加细胞中药物量。TPGS-DTX-liposome在体内能抑制肿瘤组织生长,对裸鼠无明显毒副作用。综上所述,TPGS-DTX-liposome能有效克服肿瘤多药耐药,为临床治疗多药耐药肿瘤提供参考依据。