目的:本研究首先通过正交试验优选大豆异黄酮清斑软胶囊复方的合理配比,然后从体内和体外两个水平检测和分析大豆异黄酮清斑软胶囊对黄褐斑黑色素的影响并探讨其抗氧化作用机制,为进一步研制开发成为防治黄褐斑的新型保健食品提供实验基础和理论数据。方法:(1)采用正交实验优选、确定大豆异黄酮清斑软胶囊复方配比。(2)采用黄体酮注射法构建小鼠黄褐斑模型,经给药治疗后测定小鼠血和肝脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperox i dase,GSH-PX)等的含量变化;采用多巴氧化法观察清斑胶囊对酪氨酸酶(TYR)活性的影响;免疫组化法观察对小鼠皮肤组织黑色素细胞(MC)的影响。(3)以小鼠B16黑素细胞作为受试细胞,选择氢醌作为阳性对照药物,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定药物对细胞增殖的影响,采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响,采用氢氧化钠溶解法测定黑素含量变化。结果:(1)小鼠黄褐斑模型血清中SOD、GSH-PX活性明显降低、MDA增加,低、中、高三个剂量组分别给药后,与模型对照组相比,给药组均表现出明显改善作用,中、高剂量组与模型组比较有显著性(p<0.05),并具有剂量依赖性,同时中、高剂量组清斑胶囊可以明显升高小鼠肝脏的SOD,降低MDA水平(p<0.05)。(2)正常对照组表皮中未见黑素细胞表达,毛囊及皮脂腺基底细胞中可见少量黑素细胞,且着色较浅,呈现浅黄色。模型组黑素细胞阳性表达明显增多,分布于毛囊基底细胞中,着色较深,染色成黄褐色。清斑胶囊高、中、低剂量组可以明显减少黑素细胞的表达。(3)体外实验表明不同浓度清斑胶囊对酪氨酸酶有显著抑制作用,各浓度之间又以高浓度的作用最强,与模型组比较差异显著(p<0.05)。(4)清斑胶囊对小鼠B16细胞黑色素增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶的影响:不同浓度大豆异黄酮清斑软胶囊对B16黑素细胞的增殖及其黑素合成均有不同程度的抑制作用,并且随着受试物浓度的增加呈浓度依赖性抑制(P<0.05)。随着药物浓度的增加,细胞的酪氨酸酶活性逐渐降低,两者关系成反比(P<0.05)。结论:(1)清斑胶囊低中高三剂量组可以明显提高小鼠血和肝脏中SOD、GSH-PX活力,降低MDA含量,有效抑制皮肤组织黑色素的形成。从细胞实验来看大豆异黄酮清斑软胶囊对黑素细胞增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少、酪氨酸酶活性减弱,降低酪氨酸酶活性,从而减少黑素合成。(2)说明清斑胶囊其治疗黄褐斑的机制不是单一的,而是包含了多种机制,通过抑制黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性和提高机体SOD、GSH-PX活性,清除多余氧自由基来治疗黄褐斑。(3)清斑胶囊具有良好的抗氧化作用及对黄体酮诱导的小鼠黄褐斑具有良好的预防作用。