猪小肠上皮细胞miRNA对猪流行性腹泻病毒复制的影响及其分子机制的初步研究

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猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)能引起一周龄仔猪腹泻、呕吐、脱水乃至死亡的病毒性疾病。miRNA是一种长约22 nt的非编码单链小RNA,它是由基因组中某个转座子编码。  为探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染猪小肠上皮细胞(intestine epithelial cells J2,IPEC-J2)后,对IPEC-J2 miRNA表达谱的影响,本实验将PEDV感染IPEC-J2,收获细胞并提取总RNA,进行Hiseq高通量测序,构建了感染组与未感染组的miRNA表达谱并进行聚类分析、GO(Gene ontology,GO)分析、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析和差异分析,并通过过表达 novel-miR-877/311/604 及ssc-miR-219a mimic观察对PEDV在IPEC-J2中复制的影响,随后又对这些miRNA调控PEDV复制的分子机制进行初步探究。结果显示显著差异表达的已知miRNA有45个,显著差异表达的未知miRNA有249个,从其中随机挑选了差异较显著的16个miRNA使用qPCR进行验证,结果与测序结果一致;对这些miRNA测序结果进行GO分析,结果显示其广泛参与生物过程、细胞成分和分子功能的调节;通过 KEGG 代谢通路分析显示 miRNA 也参与Jak-STAT、Toll样受体等信号通路的调节。还找到三个可以抑制PEDV复制的miRNA,分别为novel-miR-604、novel-miR-877和ssc-miR-219a,并对其作用机制进行了初步摸索,排除了这三个miRNA直接多用于病毒基因组、作用于细胞凋亡、细胞周期的影响,并找到了几个疑似的靶基因,如 TGFβ1,TAP1,TP53BP2,NFTC2,DDX3X。目前国内外对 PEDV的研究在感染致病机理、免疫机制等方面知之甚少,所以深入探究 PEDV 感染过程中的调控机制将极大地促进对该病的了解和防控,本研究为认识miRNA在PEDV复制中起到的作用奠定了基础。
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