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背景和目的:缺血性脑卒中(IS)是一类由于大脑主要供血动脉内血栓形成或栓塞引起局部脑组织缺血、缺氧的难治性疾病,及时血管再通是目前治疗该病的主要手段。脑缺血/再灌注损伤(CIRI)是IS最常见的并发症,也是继发性脑损伤的主要原因之一,目前临床上尚无有效治疗措施。微小核糖核酸(miRNAs)是一类内源性非编码单链小RNA分子,在CIRI过程中会发生异常改变,有可能成为IS治疗的药物作用靶点。碱性成纤维生长因子(bFGF)是用于IS防治研究最深入的一种多功能神经营养因子。本实验室前期研究中,运用了miRNA高通量测序技术检测缺血脑组织中miRNAs的表达情况,发现bFGF治疗可以引起CIRI半暗区脑组织内miR-10b-5p的差异性表达。目前尚未见到miR-10b-5p在CIRI中作用的相关研究报道。为了进一步探讨bFGF治疗对miR-10b-5p的影响及miR-10b-5p在CIRI中的作用,本课题通过动物实验和细胞实验研究了miR-10b-5p及其预测靶基因在外源性bFGF治疗CIRI中表达的变化和miR-10b-5p在CIRI中发挥的作用及机制。方法:1.通过生物信息学方法预测miR-10b-5p的靶基因;2.采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法构建SD大鼠CIRI模型,并利用外源性bFGF进行治疗,观察治疗效果;3.利用RT-qPCR检测bFGF治疗对脑组织内miR-10b-5p及其预测靶基因表达的影响;4.通过RT-qPCR和Western blot检测miR-10b-5p对预测靶基因及其蛋白表达的影响,验证二者之间的靶向关系;5.利用RT-qPCR检测bFGF处理对葡萄糖剥夺/再恢复(OGD/R)损伤PC12细胞内miR-10b-5p及其预测靶基因表达的影响;6.通过MTT实验研究miR-10b-5p对PC12细胞增殖活性的影响;7.通过OGD/R实验研究miR-10b-5p对OGD/R后PC12细胞活性和凋亡情况的影响。结果:1.miR-10b-5p的预测靶基因有17个,其中LDHA与CIRI关系最密切,可能是miR-10b-5p在CIRI中调控的关键靶基因;2.神经功能缺失评分提示MCAO大鼠模型制备成功且bFGF治疗效果显著;3.RT-qPCR检测结果显示bFGF治疗可以降低大鼠CIRI半暗区及缺血侧纹状体中miR-10b-5p的表达,并伴有LDHA mRNA水平增高;4.上调miR-10b-5p的表达可以降低PC12细胞内LDHA mRNA及其蛋白水平,反之抑制miR-10b-5p的表达可以上调PC12细胞内LDHA mRNA及其蛋白水平;5.RT-qPCR检测结果显示bFGF处理可以降低OGD/R损伤PC12细胞内miR-10b-5p的表达,并伴有LDHA mRNA水平增高;6.上调miR-10b-5p表达会抑制低分化PC12细胞增殖,而抑制miR-10b-5p表达则可以促进低分化PC12细胞增殖;7.miR-10b-5p过表达会加重OGD/R引起的细胞损伤,抑制miR-10b-5p表达则可以减轻OGD/R导致的细胞损伤。结论:1.bFGF治疗可以降低大鼠CIRI半暗区、损伤侧纹状体及OGD/R损伤PC12细胞内miR-10b-5p的表达,并伴有LDHA mRNA水平增高;2.miR-10b-5p能够调控LDHA的表达,LDHA可能是bFGF治疗CIRI过程中miR-10b-5p的关键靶基因;3.miR-10b-5p高表达能够加重CIRI,而抑制miR-10b-5p的表达则可以减轻CIRI,其机制可能与miR-10b-5p调节LDHA表达,从而影响细胞增殖和凋亡有关。