家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)蛋白的倒计时型生物钟。EA4是最早被确认的具时间间隔测定功能的酶。 根据家蚕EA4测定的氨基酸序列，以3d龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板，利用简并引物RT-PCR方法，得到308bp的部分ea4序列，其1．144nt和145-308nt分别与家蚕2个WGS(AADK01019126．1)5595-5738m和WGS(AADK01014467．1)的8636-8473nt有95％和98％的一致性，根据预测的ea4的cDNA序列，设计特异引物，以雌蛹脂肪体和卵巢RNA为模板，RT-PCR得到的519bp的eDNA序列与预测序列完全一致，并且其推测的氨基酸序列与已知的EA4部分一致性98％，证实获得了ea4全长eDNA。根据预测的ea4DNA序列设计引物，以家蚕全基因组的DNA为模板作PCR，得到WGS(AADK01019126．1)和WGS(AADK01014467．1)之间的拼接序列，最终查清了ea4基因组结构。ea4DNA全长528lbp，有3个外显子和2个内含子，位于家蚕同一条染色体上。 将ea4克隆到具His6序列标签的表达载体pET28a(+)，构建大肠杆菌融合表达质粒pET28a(+)-ea4；将重组质粒转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导，成功表达了家蚕ea4基因的融合蛋白，为Invitro研究EA4功能奠定了基础。