猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)导致仔猪呕吐、严重腹泻和脱水等病症,死亡率高达90%-100%,给养猪产业造成了严重的经济损失。为了利用TGEV的抗原蛋白构建疫苗以预防猪传染性腹泻(TGE),我们将TGEV病毒通过ST细胞繁殖、扩增,并提取其病毒总RNA基因组,利用RT-PCR技术获取TGEV-S抗原蛋白基因,并根据S蛋白的生物学特点将其截为抗原位点BC与AD两个片段进行研究;分别将BC与AD两片段亚克隆到大肠杆菌与干酪乳杆菌穿梭质粒载体中,热激转化到大肠杆菌XL1-Blue中,构建了重组质粒p LA-BC和p LA-AD,使BC与AD两片段能与Pgs A蛋白融合表达;将重组质粒电转化干酪乳杆菌内构建重组干酪乳杆菌,经SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光与流式细胞术检测鉴定,表明融合蛋白Pgs A-BC与Pgs A-AD能在重组的干酪乳杆菌内表达,表达蛋白具有生物学活性,并且BC与AD均被Pgs A蛋白锚定展示在菌体表面,所获得的重组菌分别命名为p LA-BC/L.casei和p LA-AD/L.casei.将获得的阳性重组菌株p LA-BC/L.casei和p LA-AD/L.casei以单独的或等数混合的方式,口服给SPF BALB/c鼠,运用间接ELISA方法分析血清中总体Ig G及其抗体亚类水平,以及粪便、小肠冲洗液和呼吸道洗液中Ig A抗体的动态产生规律,并通过MTT法检测T淋巴细胞的特异性增值转化能力。结果表明重组菌免疫小鼠后,能够产生高水平的抗TGEV血清抗体Ig G和肠道内黏膜抗体s Ig A抗体,证明免疫小鼠产生了特异性黏膜免疫应答和体液免疫应答,对血清抗体Ig G亚类进行分析,我们发现免疫反应偏向于TH1型细胞免疫反应,T淋巴细胞能够在抗原刺激下快速的增值具有很好的免疫记忆力。因此,我们认为所构建的两株重组乳酸杆菌的外源基因覆盖了刺突基因的前半段S1,而且包含了现今已知的所有抗原位点,作为抵抗TGEV感染的候选疫苗具有很大的可能性和良好的应用前景。