乳香是橄榄科植物乳香树Boswellia carterii Birdw.及同属植物Boswellia bhaw-dajiana Birdw.树皮渗出的树脂,具有活血行气化瘀、消肿生肌的功效。其经过醋炙后可作内服,且活血祛瘀作用增强。醋炙过程包括辅料醋的加入及加热炒制。辅料醋在乳香醋炙中的作用没有相关报道,同时,前期调查显示我国南北方地区醋乳香的色泽差异明显,南方为黑褐色,而北方为黄棕色,显示炮制程度不同。然而,何种醋乳香的活血作用更强,对于规范乳香炮制工艺具有借鉴意义。因此,本文在中医药理论的指导下,采用现代分析技术和体内外活血药效学评价方法,结合多变量统计分析,对不同种类炮制辅料醋的成分及活血作用、辅料醋对醋乳香活血作用的影响、以及不同炮制程度对醋乳香主要乳香酸成分和活血作用的影响进行了研究。以阐明乳香醋炙机理,为炮制用醋提供依据,也为保证醋乳香炮制工艺和质量标准提供科学基础。第一章:辅料醋的化学成分研究为了阐明炮制辅料醋在乳香醋炙过程中的作用,采用GC-MS分析结合统计方法以及HPLC分析方法,对比研究了符合药典炮制用醋要求的米醋和白米醋的化学成分。首先,分离得到米醋和白米醋生物碱部位,并采用GC-MS方法共分析到74个化学成分。进一步利用多变量统计学分析,寻找到区别白米醋和米醋的33种化学标记物,并以活血活性进行检索,锁定了米醋中具有活血活性的化学标记物——川芎嗪、哈尔满碱、四氢哈尔满碱和麦角胺,而在白米醋中不存在这4个成分。然后,基于GC-MS技术,以C20烷烃为对照,对4个成分进行相对峰面积计算,并采用时间序列分析的统计学方法分析,结果显示该4个化合物随米醋陈放时间延长,含量呈上升趋势,其含量随陈放时间的关系可采用线性拟合。HPLC法分析也显示,米醋中含有川芎嗪,且随存放期延长含量升高,而白米醋中不含有川芎嗪。结果提示,炮制用醋中米醋优于白米醋,且陈放时间越长的米醋含有活血作用的成分越高。第二章:不同种类醋的活血活性及其对醋乳香活血活性的影响为了明确不同辅料醋的活血活性,并确定辅料醋对醋乳香活血活性的影响。本章首先以二磷酸腺苷和花生四烯酸为诱导剂,研究了白米醋和不同陈放时间米醋和其生物碱部位、以及米醋炙乳香和白米醋炙乳香对大鼠体外全血血小板聚集的影响。进一步采用大鼠急性血瘀模型,以全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降速度、红细胞压积和凝血因子为指标,研究了白米醋和不同陈放时间米醋的体内活血作用。结果显示,米醋及其生物碱部位具有体外抑制血小板聚集的作用,并且随着米醋陈放时间的延长,抑制作用增强,而白米醋未见抑制血小板的作用;米醋炙乳香和白米醋炙乳香均可以抑制二磷酸腺苷和花生四烯酸诱导的血小板聚集,前者作用更强;体内实验结果显示,米醋及其生物碱部位均能改善急性血瘀模型大鼠的血液流变及凝血因子水平,而白米醋未见活血活性。第三章:炮制温度和时间对醋乳香性状和主要乳香酸成分的影响本章以南北方地区醋乳香色泽为参考,采用色差仪分析,研究了炮制温度(文火和中火)及炮制时间对醋乳香外观颜色影响进行了研究。结果显示,100℃文火炒制12分钟、130℃中火炒制5分钟,得到的醋乳香即可达到“表面光亮”。醋乳香颜色随炒制时间延长加深。但采用文火时,外观颜色变化非常缓慢,即使炒制30分钟,也达不到南方醋乳香的黑褐色。而采用中火炒制11分钟,则呈现黑褐色。结果提示,炮制温度是造成南、北方醋乳香外观色泽差异的决定性因素。HPLC指纹图谱显示,在280 nm检测波长下,不同炮制温度和炮制时间醋乳香的指纹图谱在保留时间为40～60 min色谱峰呈现明显差异。HPLC含量测定结果表明,南北方两种炮制程度的醋乳香,其中具有活血抗炎作用的6种主要乳香酸:11-羰基-β-乳香酸、3-乙酰-11-羰基-β-乳香酸、α-乳香酸、β-乳香酸、3-乙酰-α-乳香酸、3-乙酰-β-乳香酸的含量明显不同。与生品比较,南方醋乳香各成分升高或降低的幅度比北方醋乳香更大。第四章:南北方两种炮制程度醋乳香活血作用对比研究为明确南北方两种炮制程度对醋乳香活血活性的影响,从而为规范醋乳香炮制工艺提供依据,本章以二磷酸腺苷和花生四烯酸为诱导剂,对南北方醋乳香体外全血血小板聚集作用进行研究。并进一步采用急性血瘀模型,以全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降速度、红细胞压积、凝血因子为指标,对比评价两种醋乳香的体内活血作用。结果显示,南北方醋乳香均可以抑制二磷酸腺苷和花生四烯酸诱导的全血血小板聚集,但是南方醋乳香的抑制作用较北方醋乳香的作用更强。南北方醋乳香均可以改善急性血瘀模型大鼠的血液流变以及凝血因子,而南方醋乳香的改善效果较北方醋乳香更好。小结:本文主要进行了两个方面的工作:1.炮制用醋成分与活血活性研究。从符合药典炮制用醋标准的两种醋白米醋和米醋的化学成分和活血活性对比入手,确定米醋中含有白米醋中检测不到的生物碱类活性成分,且含量随醋的存放时间延长而增加。米醋本身具有体外和体内活血活性,活性随存放时间延长而增强,而白米醋没有相关活性。且米醋炙醋乳香活血活性强于白米醋炙醋乳香。证实炮制用醋本身具有活血活性,陈放时间较长的米醋活性越强。为乳香醋炙增效机理和炮制用醋标准提供了参考。2.醋乳香炮制程度对主要活性成分和活血活性的影响研究。以目前南、北方市售醋乳香色泽差异为事实依据,经过不同炮制温度和时间醋乳香色泽对比,确定炮制温度是引起色泽差异的主要影响因素;南北方两种炮制程度的醋乳香主要活性成分乳香酸组成和含量有明显差异,体外和体内活血活性结果表明,南方醋乳香活血作用更强。为乳香炮制工艺规范化和质量标准的完善提供了依据。