论文部分内容阅读
本论文以肉桂为原料,进行了肉桂单宁的分析方法、提取、分离纯化及抗氧化活性研究,主要研究内容和取得的成果如下：(1)改进了Folin-Denis法测定肉桂总酚的定量分析方法并建立了香草醛-硫酸法测定肉桂单宁的定量分析方法。Folin-Denis法测定肉桂总酚的方法是：取样液2mL,依次加入Folin-Denis试剂1.0mL、0.01mol·L-1EDTA溶液2.0mL以及1mol·L-1NaOH溶液2.5mL,然后用蒸馏水定容至25mL,混匀、静置显色20min后,测定720nm处吸光度,以单宁酸为标准品,制作单宁酸浓度与吸光度之间的标准曲线,线性方程为：A=22.0571c+0.0094(R2=0.9978)。稳定性、精密度和准确度试验结果分别是：RSD=0.82%(20～40min)、RSD=1.12%、RSD=2.31%(平均回收率为101.05%1。香草醛-硫酸法测定肉桂单宁的方法是：取0.5mL样液,依次加入质量浓度为30g·L-1香草醛-甲醇溶液以及体积分数30%的硫酸-甲醇溶液各2.5mL,于30℃下反应20min后,测定500nm处吸光度。以儿茶素为标准品,绘制儿茶素浓度与吸光度的标准曲线,线性方程为：A=3.0153c+0.0050(R2=0.9997)。稳定性、精密度和准确度试验结果分别是：RSD=0.68%(15～50min)、RSD=0.58%、RSD=1.40%(平均回收率为101.95%)。(2)分别进行了溶剂法和超声波辅助法对肉桂单宁的提取工艺研究,通过单因素实验以及正交试验对单宁的提取条件进行了优化。溶剂法最佳工艺条件为：乙醇体积分数60%,料液比为1：30g·mL-1,提取时间为2.5h,提取温度为70℃,该条件下单宁得率为42.35mg·g-1。超声辅助法最佳工艺条件为：料液比为1：20g·mL-1,提取温度40℃,提取时间40min,超声功率360W,乙醇体积分数50%,此条件下单宁得率为41.28mg·g-1。超声辅助法提取肉桂单宁比溶剂法更加节能、省时,有利于工业化规模生产。(3)利用有机溶剂萃取法和大孔吸附树脂法分离纯化肉桂单宁粗提物。溶剂萃取法分离纯化所得各样品中单宁含量分别为：粗提物151.0mg.g-1、初步除杂样148.9mg·g-1、乙酸乙酯萃取样169.8mg·g-1、剩余水层样127.4mg·g-1；考察了4种大孔吸附树脂静态吸附与解吸特性,其中AB-8型树脂具有较好的吸附和解吸效果,其中,最佳的静态吸附时间为6h,解吸附时间为2h,优化后的纯化工艺条件为：样液初始浓度为1.2mg·mL-1,样液pH值为4.0,上样流速为1.0mL·min-1,解吸剂乙醇体积分数为80%,洗脱流速为1.5mL·min-1,纯化后,肉桂单宁纯度由15.1%提高到29.65%。(4)对肉桂单宁粗提物、乙酸乙酯萃取物及肉桂单宁大孔树脂纯化物进行了抗氧化活性的研究,结果指出,三种肉桂单宁样品对·OH和DPPH·均具有较强的清除作用,且清除率在一定的浓度范围与浓度呈正相关,随着浓度增加而逐渐升高。达到一定浓度后,清除率基本保持不变。其中对DPPH·的清除能力较强,三种样品在浓度为0.04mg·mL-1时清除率为90%左右,强于抗坏血酸清除能力,当浓度小于等于0.03mg·mL-1时,三种样品对DPPH·清除率为抗坏血酸2倍以上。此外,在试验浓度(0.1]mg·mL-1～0.6mg·mL-1)范围内,各样品对-·OH最大清除率均超过65%,略低于抗坏血酸清除率(83.21%)。三种肉桂单宁样品清除DPPH·和·OH能力的顺序相同,均为：乙酸乙酯萃取物>树脂纯化物>肉桂单宁粗提物。