论文部分内容阅读
芍药(Paeonia lactiflora Pall.)属毛茛科多年生宿根草本植物,原产于东南亚,生长在干燥的石质山坡、河堤和稀疏林地边缘。芍药根作为一种传统中药具有很长的历史,具有抗炎、镇痛、抗菌、抗氧化、抗癌、抗抑郁、抗肝脏纤维化等作用；对自身免疫疾病、心脑血管疾病以及神经退行性疾病也能起到改善和治疗作用。芍药花无毒,可以鲜食,具有一定的食疗作用。本研究的目的是评估芍药花的抗氧化和抗炎活性,分离鉴定芍药花中的生物活性物质,为芍药花进一步综合应用于医药以及开发新型功能食品提供参考依据。1.芍药花提取物的抗氧化活性采用酒石酸亚铁比色法测定芍药花提取物的总酚含量,结果表明芍药花五种提取物中均含有一定量多酚类物质,其中甲醇提取物总酚含量最高,为44.35m*g。采用DPPH自由基清除实验、羟自由基清除实验以及超氧阴离子自由基清除实验评估芍药花提取物的抗氧化活性。原提取液稀释100倍时,芍药花水提取物和甲醇提取物的DPPH自由基清除活性分别为92.33%和90.31%,强于100μtg/mL槲皮素88.74%的清除活性；原提取液稀释200倍时,五种提取物羟自由基清除活性均大于100μg/mL槲皮素；原提取液稀释50倍时,芍药花甲醇提取物的超氧阴离子自由基清除活性为58.73%,强于100μtg/mL槲皮素49.23%的清除活性。结果表明,芍药花甲醇提取物和水提取物具有很强的自由基清除活性,这可能与它们含有多酚类物质有关。2.芍药花不同萃取物抗氧化和抗炎活性采用DPPH自由基清除实验、蛋白保护实验、超氧阴离子自由基清除实验、总抗氧化实验以及总还原力实验评估芍药花石油醚萃取物、乙醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及水萃取物的抗氧化活性,结果表明乙酸乙酯萃取物抗氧化活性最强,其次是乙醚萃取物。乙酸乙酯萃取物和乙醚萃取物清除DPPH自由基的IC50值分别为4.71μg/mL和7.31μg/mL,清除活性强于阳性对照BHA (IC50值为7.79μg/mL)；浓度为1mg/mL时,蛋白损伤抑制率分别为81.36%和88.45%；浓度为400μtg/mL时,超氧阴离子自由基清除率分别为77.73%和60.51%；两种萃取物的总抗氧化能力与总还原力均随着浓度增加而增强,其中乙酸乙酯萃取物的总抗氧化能力和总还原力强于阳性对照BHA。分别采用Folin-Ciocalteu比色法和亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠比色法测定芍药花不同萃取物的总酚含量和总黄酮含量,结果表明乙酸乙酯萃取物中的总酚含量和总黄酮含量分别为158.73mg/g和58.62mg/g,乙醚萃取物的总酚含量和总黄酮含量分别为190.48m/g和43.66mg/g。采用MTT法测定芍药花不同萃取物对RAW264.7细胞的毒性作用以及对LPS诱导的RAW264.7细胞活力降低的抑制作用,结果表明芍药花五种萃取物对RAW264.7细胞均没有表现出细胞毒性,并且能够抑制LPS引起的细胞活力的降低；其中乙酸乙酯萃取物抑制作用最强,浓度为400μg/mL时,提高细胞存活率至83.96%。采用LPS诱导的RAW264.7细胞模型评估芍药花不同萃取物的抗炎活性,结果表明乙酸乙酯萃取物和乙醚萃取物均具有很强的NO抑制活性,浓度为400μg/mL时,分别降低RAW264.7细胞内的NO含量至13.61%和13.46%。3.芍药花抗氧化和抗炎活性成分的提取与分离采用硅胶柱层析(氯仿：甲醇＝40：1,20：1,10：1,5：1,2.5：1,0：1)和Sephadex LH-20凝胶柱层析分离芍药花乙酸乙酯萃取物与乙醚萃取物,得到7个单一物质,记为A1-A7。通过HPLC-MS与标准品进行比对,最终鉴定A1为1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖,A2为没食子酸甲酯,A3为紫云英苷。定量结果表明,芍药花干燥粉末中A1-A3的含量分别为5.09%、3.30%和3.39%。此外,结合HPLC-MS分析与相关文献推测A4为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷,A5为山奈酚-7-0-β-D-葡萄糖苷,A6为山奈酚-3-O-β-D-(2"-没食子酸酰)葡萄糖苷以及A7为槲皮素-3-O-β-D-(2"-没食子酰)葡萄糖苷。综上所述,芍药花具有抗氧化和抗炎活性,有望成为治疗氧化应激与炎症相关疾病的潜在药物。芍药花的抗氧化和抗炎活性可能与1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、没食子酸甲酯、紫云英苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷等活性成分的存在有关。从芍药花中提取分离出的多种化学成分为进一步研究芍药花不同的药理作用提供了物质基础。