论文部分内容阅读
目的探究蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在皮肤恶性黑素瘤(CMM)中的表达情况及临床意义,并进一步分析CIP2A对CMM细胞(A375)侵袭、迁移的影响。方法(1)采用免疫印迹法检测3例CMM组织及其瘤旁组织中CIP2A蛋白表达情况。(2)采用免疫组化法检测65例CMM、30例痣细胞痣和30例正常人上皮组织中CIP2A蛋白表达情况,并分析CMM组织中CIP2A蛋白表达水平与患者临床病理特征及总体生存率的关系。(3)通过免疫印迹、定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)法检测A375细胞及正常皮肤黑素细胞(NHMs)中CIP2A蛋白和m RNA表达水平。(4)利用Lipofectamine2000将CIP2A si RNA转染到A375细胞中,并通过免疫印迹、QRT-PCR法检测A375细胞转染48h后CIP2A蛋白及m RNA表达水平。(5)通过侵袭试验探究CIP2A对A375细胞侵袭能力的影响。(6)通过划痕实验及迁移试验探究CIP2A对A375细胞迁移能力的影响。结果(1)CMM组织中CIP2A蛋白表达水平显著高于其瘤旁组织。(2)65例CMM中,CIP2A在50例CMM中高表达,在15例CMM中低表达;30例痣细胞痣中,CIP2A在21例中低表达,在9例中无表达;CIP2A在30例正常皮肤组织中几乎无表达(P<0.001)。CIP2A表达水平与CMM患者肿瘤Breslow厚度(P=0.0021)、Clark’s分级(P=0.0024)和淋巴结转移(P=0.0008)之间密切相关,与肿瘤患者性别(P=0.5483)、年龄(P=0.7851)、肿瘤部位(P=0.5634)以及溃疡的发生(P=0.8962)之间无明显相关性。Kaplan-Meier分析显示,CMM患者死亡率与CIP2A蛋白表达水平(P=0.046)及CIP2A浸润深度(P=0.002)成正比。(3)免疫印迹、QRT-PCR结果显示,A375细胞中CIP2A蛋白及m RNA表达水平显著高于NHMs。(4)免疫印迹、QRT-PCR结果显示,转染组A375细胞中的CIP2A蛋白及m RNA表达水平显著低于对照组细胞。(5)侵袭实验表明,沉默CIP2A基因能削弱A375细胞的侵袭能力。(6)划痕实验及迁移试验表明,沉默CIP2A基因能削弱A375细胞的迁移能力。结论(1)CIP2A在CMM标本中高表达,提示CIP2A可能参与了CMM的发病过程。(2)CIP2A高表达与CMM患者术后生存率有显著相关性,提示CIP2A可能与患者预后有关。(3)CIP2A的高表达能促进恶性黑素瘤A375细胞的侵袭迁移,提示CIP2A可能与CMM的发生发展有关。