【摘 要】
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含编码非特异性酸性磷酸酶基因（phoN）的细菌如柠檬酸杆菌（Citrobacter freudii）等能有效地吸附去除废水中的重金属,但这类微生物对辐射敏感。耐辐射奇球菌（Deinoeoeeus radiodurans）是最抗辐射的生物之一,存活的辐射剂量高达15kGy。利用基因工程技术将phoN克隆到D. radiodurans中,使之能在辐射环境下更大容量富集水中的U（Ⅵ）,实现铀等放射性重金
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含编码非特异性酸性磷酸酶基因（phoN）的细菌如柠檬酸杆菌（Citrobacter freudii）等能有效地吸附去除废水中的重金属,但这类微生物对辐射敏感。耐辐射奇球菌（Deinoeoeeus radiodurans）是最抗辐射的生物之一,存活的辐射剂量高达15kGy。利用基因工程技术将phoN克隆到D. radiodurans中,使之能在辐射环境下更大容量富集水中的U（Ⅵ）,实现铀等放射性重金属污染的有效生物修复及再资源化,具有重要的科学意义。本研究内容包括目的基因的扩增,重组穿梭表达载体的构建、重组菌的筛选、PhoN蛋白的表达及重组菌D. radiodurans富集U（Ⅵ）性能的研究等。以Salmonella enterica serovar Typhimurium基因组DNA为模板,PCR扩增得到phoN,将其克隆到pMD18T-Vector中。用SpeⅠ、NdeⅠ限制性内切酶对重组转移载体T-VectorphoN与穿梭载体pRADZ3分别进行双酶切,再将phoN片段和穿梭载体pRADZ3中的大片段通过T4DNA连接酶连接。经PCR与双酶切双重鉴定,证实重组穿梭载体pRADZ3phoN构建成功。转化E. coli DH5α与D.radiodurans感受态细胞,使其在正常情况下（不需诱导剂）表达PhoN蛋白,经Western blot证实phoN基因在E.coli DH5α与D. radiodurans中成功表达。重组菌E. coli与重组菌D. radiodurans富集U（Ⅵ）的实验表明,重组菌对U（Ⅵ）的去除率较相应的宿主菌均有较大的提高,其中重组菌D. radiodurans对U（Ⅵ）的富集量较宿主菌D. radiodurans的增加约2倍,去除率达85.64%。比较重组菌D. radiodurans与宿主菌D. radiodurans的生长曲线,表明重组穿梭质粒的导入使得重组菌的生长受到抑制。pH对重组菌D. radiodurans富集U（Ⅵ）的过程有显著影响。当pH为6时去除率达到最大值88.32%,在低pH下,去除率极低。在60min时基本达到了吸附平衡。其富集量与菌体浓度负相关,与铀起始浓度正相关。
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