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目的失眠作为新发精神性疾病(如焦虑,抑郁,双相情感障碍等)的风险因子,与女性其他阶段相比,在围绝经期表现出明显的高发性和易感性。由于围绝经期动物模型的限制,围绝经期失眠是否加重绝经期精神性疾病的发生发展,对围绝经期失眠进行干预,是否可延缓绝经相关的焦虑、抑郁等情绪障碍的发生,均不十分清楚。近些年国外研究发现,VCD致小鼠卵巢衰竭动物模型可作为围绝经期动物模型,但其是否适用于ICR小鼠尚不清楚。本实验室前期研究发现,柴胡加龙骨牡蛎汤可改善去卵巢动物的睡眠及对抗去卵巢联合睡眠剥夺小鼠的焦虑样行为。因此,本研究在建立VCD致ICR小鼠围绝经期动物模型的基础上,探讨柴胡加龙骨牡蛎汤改善围绝经期睡眠剥夺小鼠的焦虑、抑郁样行为的作用及作用机制,为预防绝经与衰老相关精神疾病的发生提供最佳的干预时期及干预措施,为柴胡加龙骨牡蛎汤的临床应用提供药效学基础。方法56日龄ICR小鼠腹腔注射VCD(160 mg/kg,5 d/w,共4 w,即共注射20 d)或等体积的芝麻油,小鼠每日进行阴道涂片,并于注射VCD或芝麻油的第20 d,第35 d和第52 d,进行高架十字迷宫和悬尾测试,并观察测定各组小鼠的卵巢形态和闭锁卵泡数目,子宫系数和卵巢系数,血清FSH,E2和CORT水平。以VCD致围绝经期合并跑步机睡眠剥夺小鼠(3 s运动,12 s停止,2.5 m/min,连续14 d)为围绝经期睡眠剥夺模型,注射VCD前14 d合并跑步机睡眠剥夺小鼠为非围绝经期睡眠剥夺模型。睡眠剥夺期间,围绝经期睡眠剥夺小鼠分别灌胃给予CJLM70E(48 mg/kg,0.2 mL/10g)、雌二醇(0.13 mg/kg,0.2 mL/10g)及同体积1%CMC-Na,非围绝经期睡眠剥夺小鼠灌胃给予同体积1%CMC-Na。VCD致围绝经期无睡眠剥夺小鼠,仅在围绝经期连续14 d给予同体积1%CMC-Na。各组均于注射VCD第52 d进行高架十字迷宫测试和悬尾测试,HE染色观察测定各组小鼠的卵巢形态和闭锁卵泡数目,测定子宫系数和卵巢系数,酶联免疫法测定血清FSH,E2和CORT水平,海马E2和5-HT水平,免疫荧光法测定小鼠海马内BDNF、TrkB、ERβ和5-HT2A表达。结果注射VCD的第20 d开始,约90%ICR小鼠的动情周期呈现动情前期/动情期和动情间期相互交替,持续约2 w,至VCD 35 d。至VCD 52 d,VCD小鼠阴道涂片均呈持续的动情间期,持续时间超过1 w,其中80%VCD小鼠持续时间超过2 w。与Control小鼠相比,对应天数的VCD小鼠卵巢形态受损,原始卵泡少见,卵母细胞固缩,黄体少见,颗粒细胞较少且排列紊乱,35 d和52 d小鼠闭锁卵泡数量明显增加(p<0.01);自注射VCD起的第35 d,小鼠的子宫和卵巢系数均明显降低(p<0.01);自注射VCD起的第52 d,小鼠的子宫系数(p<0.01)和卵巢系数(p<0.05)降低;自注射VCD起的第20 d(p<0.05),35 d(p<0.01)和52 d(p<0.01),血清FSH水平明显增高,E2水平明显降低(p<0.01);自注射VCD起的第20 d和52 d,小鼠的CORT明显升高(p<0.01);自注射VCD起的第20 d(p<0.01)和35 d(p<0.05),VCD小鼠的OE%和OT%明显减少;自注射VCD起的第20 d,35 d和52 d,对应天数VCD小鼠的不动时间明显延长(p<0.01)。与非围绝经期睡眠剥夺相比,围绝经期睡眠剥夺小鼠的OE%和OT%明显下降(p<0.01),卵巢形态受到损伤,闭锁卵泡数量增加(p=0.052),卵巢系数明显降低(p<0.05),血清E2水平明显降低(p<0.01),CORT水平升高(p=0.08),海马E2和5-HT水平降低(p<0.01),海马TrkB面密度下降(p=0.07),海马5-HT2A面密度明显增加(p<0.01)。与围绝经期无睡眠剥夺小鼠相比,围绝经期睡眠剥夺小鼠的OE%和OT%明显下降(p<0.01),悬尾不动时间明显增加(p<0.05),卵巢内卵母细胞固缩,透明带膨胀,闭锁卵泡数量增加(p<0.05),子宫系数与卵巢系数降低(p<0.05),血清E2水平下降(p<0.05),CORT水平升高(p<0.05),海马E2和5-HT水平下降(p<0.05),海马BDNF,TrkB和ERβ表达明显下降(p<0.05),5-HT2A表达明显增强(p<0.01)。CJLM70E(除增加子宫系数之外)和雌二醇(除增加ERβ表达之外)均可明显拮抗上述指标的异常。结论ICR小鼠自注射VCD的第35 d进入围绝经期,第52 d进入绝经期。围绝经期睡眠剥夺可加剧小鼠绝经期的焦虑和抑郁样行为的发生,CJLM70E可改善围绝经期睡眠剥夺致绝经期小鼠焦虑和抑郁样行为的加剧,作用机制可能是通过影响海马ERβ/BDNF/TrkB/5-HT2A信号通路进而影响负性情绪的发生。