鼢鼠为啮齿目(Rodentia)鼹形鼠科(Spalacidae)鼢鼠亚科(Myospalacinae),是我国林业有害生物之一。其食性杂,危害林木种类多达95种,其主要以植物的根茎为食,因此对我国林业发展造成极大的影响。但由于其终生营地下洞道生活,不易受到天敌危害和人类干扰,导致鼢鼠的防治成为困难。物理与化学防治在鼢鼠的防治上存在不足,相较之下生物防治污染小,环境友好。根据近年来的调查发现,甘肃鼢鼠皮下存在一种寄生蝇,在野外环境下寄生率约为30%。皮蝇属双翅目(Diptera)皮蝇科(Hypodermatidae),可寄生于多种哺乳动物皮下,造成皮蝇蛆病,引起寄主动物皮肤瘙痒,导致其精神状态差,繁殖率下降。幼虫发育成熟后由皮下钻出,会引起皮肤穿孔造成感染,对其生理活动产生严重危害,甚至引起其死亡。因此,利用皮蝇寄生对甘肃鼢鼠进行防治,从生态学角度来看这也是一种较为安全的生物防治方法。关于皮蝇蛆病的研究发现,在皮蝇感染初期可通过ELISA检测到其特征抗原皮蝇素。在对皮蝇素进行结构和功能分析发现,皮蝇素有三种分别为皮蝇素A、皮蝇素B及皮蝇素C,均属于丝氨酸蛋白酶家族且具有降解C3补体与结缔组织的能力,因此在皮蝇寄生过程中可帮助其逃避宿主免疫。根据以上特点,利用皮蝇寄生对鼢鼠的影响或将皮蝇作为媒介昆虫携带鼢鼠专性致病性病原菌,为鼢鼠的生物防治提供了一个新的思路。本研究针对寄生于甘肃鼢鼠皮下的皮蝇生物学特性进行了观察,在生物学习性调查的基础上,采用形态学及分子生物学方法进行了寄生于甘肃鼢鼠皮下皮蝇的物种鉴定,明确鼢鼠寄生皮蝇的生物学特征及明确寄生皮蝇的发生时期,为后续能够有效的利用皮蝇防治鼢鼠做基础。其次,通过转录组测序挖掘皮蝇素基因,明确其寄生过程中的关键蛋白,并选择其中的两个基因进行荧光定量分析,以了解其在不同龄期皮蝇中的表达情况。最后对筛选出的四条皮蝇素基因做生物信息学分析,明确其结构特征,为后期阐明皮蝇寄生鼢鼠的分子机制,以及两者的相互作用的关系,并为后期皮蝇素的应用提供基础数据与理论依据。主要结果如下:一、甘肃鼢鼠皮下寄生蝇的生物学特性(1)皮蝇成虫的产卵期在8月至9月,皮蝇的1龄幼虫发生高峰期为9月,2龄幼虫主要发生在10月,3龄幼虫集中在11月出现,且持续至来年。(2)该皮蝇幼虫主要寄生在甘肃鼢鼠的鼠鼷部及下背部,偶尔寄生于前肢。该皮蝇寄生后在寄生部位直接发育成3龄幼虫,在甘肃鼢鼠皮下不发生移行。二、形态学及分子生物学鉴定(1)形态学鉴定:皮蝇气门板表面平整无凸起的棘,气门板上排列有细长的气门钮;虫体腹面第七节边缘有排列整齐的棘,第十节有排列不规则的细小的棘,与寄生于其他物种的皮蝇形态学特征比较,寄生于甘肃鼢鼠皮下的寄生蝇为兔葫颜皮蝇(Oestromyia leporina)。(2)分子生物学鉴定:通过PCR-RFLP研究发现甘肃鼢鼠皮下寄生蝇为同一物种,采用COI基因的通用引物UEA7-UEA10扩增序列片段长度约为680bp,经NCBI中公布的序列比较分析,与兔葫颜皮蝇(O.leporina)的序列最为接近,相似性为96%-97%。三、转录组挖掘皮蝇素基因(1)通过兔葫颜皮蝇幼虫转录组测序,挖掘出4条兔葫颜皮蝇的皮蝇素基因,经序列比对,确定皮蝇素基因分别为皮蝇素A,皮蝇素B,皮蝇C1及皮蝇素C2共三种。(2)通过荧光定量PCR检测,三种皮蝇素均在1龄幼虫中有表达,皮蝇素B随着幼虫的发育其表达量随之下降,皮蝇素C随着幼虫的发育其表达量依次增高。(3)兔葫颜皮蝇的皮蝇素属于Tryp＿SPc(胰类丝氨酸蛋白酶)超家族。(4)通过皮蝇素基因序列进化树分析,兔葫颜皮蝇三种皮蝇素与鹿皮蝇的皮蝇素亲缘关系更近,其次与纹皮蝇及牛皮蝇聚为一支。