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目的:冠状动脉慢血流（Coronary Slow Flow,CSF）是指冠状动脉造影（Coronary arteriography,CAG）证实冠状动脉无明显狭窄,但冠状动脉内血流速度减慢的现象。前期研究证实,CSF患者心脏功能已出现损害,更为严重者可导致致死性心律失常等恶性心血管事件。因而CSF患者应给予早期干预。由于目前关于CSF机制研究并不多见,因此机制不清,目前临床没有规范的治疗方法。目前CSF诊断依赖于CAG,因其有创性和高额的费用使CSF的诊断和随访进展困难。目前认为血管内皮功能减低可能是CSF主要发病原因。内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）是血管收缩因子,当内皮功能损伤时,ET-1水平升高。肱动脉血流介导的血管内皮舒张功能（Flow mediated dilatation,FMD）反应血管舒张功能,是临床中常用的无创血管内皮功能检测方法。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）在心血管疾病的发生发展进程中扮演重要角色。肺腺癌转录物1（lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1）,首次是在非小细胞肺癌中被报道。在心血管疾病内皮功能障碍中,MALAT1也发挥重要作用。其可参与诸如内皮细胞增殖,凋亡,死亡等细胞功能的调控。微小RNA（microRNA,miRNA）可与靶基因3’端非翻译区（Untranslated region,UTR）靶向结合,从而抑制靶基因的功能进而调控细胞功能。miRNAs参与心血管疾病的发生发展,已经成为治疗心血管疾病的新靶点。已有报道miR-181b-5p参与调控心血管疾病发生发展,如冠状动脉心脏病,动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）,动脉瘤以及心肌肥厚等。HOXD9是同源框基因（Homeobox Genes,HOX Genes）家族的一员,作为转录因子参与疾病信号分子的转录调控的调节。在心血管领域,有关HOXD9的报道比较少见,有研究认为,其在调控人微血管内皮细胞或人脐静脉内皮细胞功能中起到一定作用。转录因子肌细胞增强因子2A（Myocyte enhancer factor 2A,MEF2A）是MEF2家族的成员,可以作为一种维护血管内皮功能稳定性的活性因子发挥作用,参与内皮炎症反应,影响内皮细胞的完整性,参与内皮细胞凋亡和增殖等功能。本研究为明确CSF发生机制,寻找分子生物学靶点,为CSF诊断和治疗提供生物标志物。方法:第一部分:收集CAG术诊断为CSF的患者41例,作为病例组,年龄和性别匹配37例冠状动脉血流速度正常的患者为对照组。应用TFC（TIMI frame count,TIMI血流帧数）评价冠状动脉血流速度。应用常规超声心动图,组织多普勒及二维斑点追踪技术评价研究对象左心室功能;应用FMD评价内皮功能。应用ELISA和RT-PCR方法检测研究对象血浆ET-1,MALAT1和miR-181b-5p表达情况。第二部分:构建氧糖剥夺条件下CSF诱导的HUVECs,RT-PCR检测目的MALAT1,miR-181b-5p,MEF2A及ET-1表达水平;Western blot检测ET-1及MEF2A表达水平;构建MALAT1表达沉默腺病毒,过表达Synergistic Activation Mediator（SAM）双载体慢病毒,miR-181b-5p过表达与表达沉默腺病毒,MEF2A过表达与表达沉默腺病毒,分别感染CSF-HUVECs,获得MALAT1表达沉默和过表达的CSF-HUVECs,miR-181b过表达及表达沉默的CSF-HUVECs,MALAT1与miR-181b双过表达的CSF-HUVECs,MEF2A过表达与表达沉默的CSFHUVECs,MEF2A与miR-181b双过表达的CSF-HUVECs。荧光显微镜下观察细胞带荧光情况确认转染效率。CCK8和Ed U实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力;双荧光素酶报告基因系统验证miR-181b-5p和MEF2A,miR-181b-5p和MALAT1存在靶向结合作用;染色质免疫共沉淀实验验证MEF2A与ET-1启动子区存在结合作用。第三部分:构建CSF诱导的HUVECs,RT-PCR检测目的HOXD9表达水平;Western blot检测HOXD9表达水平;构建HOXD9沉默的CSF-HUVECs,HOXD9表达沉默及MALAT1过表达的CSF-HUVECs。CCK8和EdU实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力;Western blot检测ET-1的表达情况;ChIP实验验证HOXD9与MALAT1启动子区存在结合作用。结果:1.MALAT1和ET-1在CSF患者外周血血浆中表达升高,miR-181b-5p降低;CSF患者FMD减低,GLS减低,MV-E减低;MALAT1,miR-181b-5p和ET-1在CSF患者外周血中表达情况与CSF患者冠状动脉血流速度相关,可以用作CSF的预测指标。2.与正常培养HUVECs相比,CSF-HUVECs增殖减低,凋亡增加,ET-1表达增加。3.MALAT1在CSF-HUVECs中高表达,沉默MALAT1可以使CSF-HUVECs的增殖增加,凋亡减少,ET-1减少。4.miR-181b-5p在CSF-HUVECs中低表达;过表达miR-181b-5p可以使CSF-HUVECs的增殖增加,凋亡减少,ET-1表达减低。5.MALAT1可与miR-181b-5p结合,过表达MALAT1可以逆转miR-181b-5p对内皮细胞的保护作用,使增殖减少,凋亡增加,ET-1表达增加。6.MEF2A在CSF-HUVECs中高表达,沉默MEF2A使CSF-HUVECs的增殖增加,凋亡减少,ET-1表达减少;过表达MEF2A抑制增殖,促进凋亡和ET-1的表达。7.MEF2A与ET-1启动子区结合,调控其转录。10.MEF2A与miR-181b-5p靶向结合。8.沉默miR-181b-5p显著增加MEF2A表达;上调miR-181b-5p抑制MEF2A表达。沉默MALAT1显著抑制MEF2A表达;进一步上调miR-181b-5p,可以恢复MEF2A的表达。在过表达miR-181b-5p基础上过表达MEF2A,可以逆转过表达miR-181b-5p诱导的增殖的增加,凋亡的减少和ET-1表达的减少。9.HOXD9在CSF-HUVEC中表达上调。沉默HOXD9可以使增殖增加,凋亡减少,ET-1表达减少;进一步过表达MALAT1可以逆转沉默HOXD9后的作用。10.HOXD9对MALAT1进行转录调控参与调节CSFHUVECs内皮功能。结论:1.本研究证实CSF患者内皮功能减低;MALAT1和ET-1在CSF患者外周血中表达升高,miR-181b-5p在CSF患者外周血中表达减少,且与冠状动脉血流速度有相关性;MALAT1,miR-181b-5p和ET-1可以作为生物学标志物对CSF起预测作用。2.MALAT1可通过海绵吸附作用结合miR-181b-5p,从而减弱miR-181b-5p对靶基因MEF2A的负向调控作用,上调MEF2A的表达,进一步促进下游ET-1的转录,影响CSF血管内皮功能。3.HOXD9转录调控MALAT1影响CSF血管内皮功能。