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目的:DEPDC1是包含一个DEP结构域的癌蛋白,除在睾丸中表达外,在其他正常人体组织中被很难检测到。已有研究表明DEPDC1在膀胱癌、乳腺癌、非小细胞肺癌及肝癌等多种癌中高表达。DEPDC1在膀胱癌中的作用研究得比较清楚,最近的研究发现锌指蛋白224(zinc finger protein224,ZNF224)是与DEPDC1发挥功能相关的重要蛋白,在体内和体外实验表明,用干扰多肽(DEPDC1的第611至628位氨基酸序列,并在其N端加上11个精氨酸,简写为11R-DEP:611-628)阻断两者形成复合物,则能显著降低细胞的生存能力。但到目前为止,DEPDC1在肝癌中的具体功能及机制尚不清楚。本研究旨在探寻癌蛋白DEPDC1在肝癌细胞HepG2的的作用及机制,为肝细胞癌的临床治疗提供理论基础。方法:(1)运用Western blot检测DEPDC1在肝癌细胞系中的表达。(2)通过MTT实验筛选出对HepG2细胞生长抑制最适的药物浓度。(3)利用干扰多肽抑制DEPDC1在HepG2细胞中的功能,通过显微镜观察细胞形态。(4)在干扰多肽组和对照多肽组处理HepG2细胞后,运用Tunel染色法检测HepG2细胞的增殖及凋亡。(5)在干扰多肽和对照多肽处理HepG2细胞后,在3h、6h、12h和24h处收集细胞及提取蛋白,运用Western blot检测casepase-3和cleaved casepase-3的表达。(6)在干扰多肽和对照多肽处理HepG2细胞后,在1h、6h及12h时运用荧光染色定位NF-κB因子,并在荧光显微镜下观察NF-κB在细胞内的分布情况。(7)干扰多肽干预处理HepG2细胞后,运用Western blot检测DEPDC1的表达。结果:(1)Western blot结果显示DEPDC1在HepG2细胞中的表达明显高于SK-hep1,SMMC7721,BEL7402,QGY7701细胞。(2)对干扰多肽组和对照多肽组的时间梯度及浓度梯度的MTT实验检测,显示出干扰多肽抑制HepG2细胞生长,且3uM为干扰多肽药物的最佳作用浓度。(3)在显微镜下观察干扰多肽处理的Hep G2细胞结果显示:细胞数量明显较对照多肽组低,细胞形态明显改变,生长抑制。(4)经过干扰多肽组和对照多肽组处理的HepG2细胞,经过Tunel染色法检测,发现干扰多肽组Hep G2细胞的阳性率明显高于对照多肽组,细胞生长受抑制,凋亡明显增加。(5)在干扰多肽处理的HepG2细胞,在3h-6h-12h-24h提取蛋白运用Western blot技术检测发现:casepase-3的表达较对照多肽组减少,而cleaved casepase-3的表达较对照多肽增加。(6)在干扰多肽和对照多肽处理HepG2细胞后,在1h、6h及12h时运用免疫荧光染色及DAPI细胞核染色,在荧光显微镜下观察发现:干扰多肽组干预的Hep G2细胞,随着时间的增加,细胞核内分布的NF-κB减少。(7)运用Western blot检测,发现干扰多肽组的DEPDC1表达量明显较对照多肽组低,提示DEPDC1的表达可能受DEPDC1-ZNF224的调控。结论:DEPDC1在多种肝癌细胞系中表达明显上调。DEPDC1在Hep G2中的作用是通过NF-κB信号通路抑制细胞凋亡而促进细胞增殖,从而有利于肝癌发生。DEPDC1-ZNF224可能是肝癌的潜在治疗靶点。多肽11R-DEP:611-628可能是潜在的肝癌治疗药物。